Question

高浓度的铵盐对海水养殖中的对虾有一定的毒害作用，是制约其大规模养殖的环境因素之一，具有高降解能力的硝化细菌可有效净化水体中铵盐，降低对虾的死亡率，科研人员拟从当地对虾养殖池塘中筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，操作流程如下图1，请回答下列问题：

（1）为了筛选出硝化细菌，在配制选择培养基时，需要以______为唯一氮源。

（2）该硝化细菌在半固体培养基试管中培养时，其生长特征符合图2中①所示，由此推测，利用锥形瓶培养该硝化细菌时需要振荡培养的目的是增加硝化细菌与______、______的充分接触。

 

（3）纯化菌种时，除图1中所示的接种方法外，还可采用______法。两种方法的原理相似，都是先对菌悬液进行______，使聚集的菌种分散开，最后在平板上形成单个菌落。

（4）在利用平板计数时，需每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数，最后选取稳定时的菌落数作为记录结果，这样可以避免因培养时间不足造成______，导致统计结果偏小。为使获得的实验数据准确，还应对每种候选菌株设置______。

（5）将筛选出的等量的三种候选菌甲、乙、丙，分别接入铵盐浓度为40mg·L^-1的模拟养殖污水中，在适宜条件下培养48h，结果如图3。据图分析，应选择候选菌______（填甲、乙或丙）作为菌种进行后续培养。

Answer

铵盐 营养物质 溶解氧（顺序可颠倒） 稀释涂布平板法 稀释 遗漏菌落的数目 （至少3个）平行组 乙

【解析】

硝化细菌是自养型生物，能利用化学能将CO2还原为有机物。单菌落分离法包含划线分离法和涂布分离法，常用于分离获得单菌落。划线分离法是用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。

（1）为了筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，在配制选择培养基时，需要以铵盐为唯一氮源。

（2）该硝化细菌在半固体培养基试管中培养时，其生长特征符合图2中①所示，由此推测，利用锥形瓶培养该硝化细菌时需要振荡培养的目的是增加硝化细菌与营养物质、溶解氧的充分接触，促进硝化细菌的繁殖。

（3）图1中所示的接种方法为划线分离法，还可采用稀释涂布平板法获得单菌落，纯化菌种。两种方法的原理相似，都是先对菌悬液进行稀释，使聚集的菌种分散开，最后在平板上形成单个菌落。

（4）菌落生长需要时间，在利用平板计数时，需每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数，最后选取稳定时的菌落数作为记录结果，这样可以避免因培养时间不足造成遗漏菌落的数目，导致统计结果偏小。为使获得的实验数据准确，还应对每种候选菌株设置（至少3个）平行组。

（5）据图分析，乙的铵盐浓度最低，说明乙菌种对铵盐的降解效果最好，应选择候选菌乙作为菌种进行后续培养。