Question

下表为某培养基的配方：

成分	牛肉膏	葡萄糖	K2HPO4	伊红	美蓝	琼脂	蒸馏水
含量	10g	10g	2g	0.4g	0.065g	适量	1000mL

（1）以上培养基配方可以用于鉴别自来水中的______，菌落呈_____色。

（2）若此培养基含有青霉素，可用于筛选含_________的转基因大肠杆菌。

（3）根据培养皿上菌落的平均数可以计算自来水中大肠杆菌的密度，原因是___________________________________________________。

（4）在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的自来水样品溶液0．1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为18、153、462、164和184。该过程采取的接种方法是过滤自来水后的滤膜放在此培养基上，此方法叫做_______，每升自来水中大肠杆菌的数量为________个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较小，原因是___________________________________。

（5）统计菌落数目时，一定要选取菌落数目稳定时的记录数据作为结果，可以防止__________________________________________________。

Answer

大肠杆菌 黑 青霉素抗性基因（或抗青霉素基因） 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌 滤膜法 1．67×1011 血细胞计数法统计的是总菌数，而滤膜法统计时，当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落，故用滤膜法测得的菌落数偏低 培养时间不足而导致计数时遗漏部分菌落

【解析】

根据表格分析，该培养基的成分中牛肉膏可以提供碳源和氮源，葡萄糖可以提供碳源，磷酸氢二钾为无机盐；该培养基含有凝固剂琼脂，说明为固体培养基；该培养基含有伊红、美蓝，可以用于鉴别大肠杆菌。

（1）伊红-美蓝培养基可用于鉴别自来水中的大肠杆菌，菌落呈黑色。

（2）若此培养基含有青霉素，则其可用于筛选含青霉素抗性基因的大肠杆菌。

（3）由于当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，所以根据培养皿上菌落的平均数可以计算自来水中大肠杆菌的密度。

（4）根据题意分析，该过程采取的接种方法是过滤自来水后的滤膜放在此培养基上，为滤膜法。统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为 153、164 和184的平板计数，每克该土壤样品中的菌落数对应的应该是每毫升菌液中的细菌数目，所以每升该土壤样品中的菌落数为(153+164+184)÷3÷0.1×105×103=1.67×1011。使用滤膜法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而血细胞计数法计数统计的总菌数，包括活菌和死菌，所以用滤膜法计数测得的细菌数较少。

（5）统计菌落数目时，一定要选取菌落数目稳定时的记录数据作为结果，可以防止因培养时间不足而导致计数时遗漏部分菌落。