Question

乳酸菌数量是评价活性乳酸菌制品质量的重要指标。研究小组用具有乳酸菌筛选功能的MRS培养基对某品牌酸奶中乳酸菌数进行研究。将乳酸菌专用MRS培养基倒平板，每个平板接人0．1 mL酸奶样品的稀释菌液，涂布均匀。回答下列问题：

（l）为防止杂菌污染需要对培养基进行高压蒸汽灭菌，灭菌是指____。

（2）梯度稀释时，应用____对酸奶进行稀释。若要将样品稀释10倍，可用无菌移液管吸取5 mL酸奶样品加入盛有____mL稀释液的三角瓶中充分混匀。

（3）为统计乳酸菌数量，宜采用____法接种。在实验中还要设置未接种的对照组，这样做的目的是____。

（4）平板接种后需对培养皿进行处理，再放置在培养箱中37℃恒温培养。该小组设计三种不同的处理方案：①将培养皿置于点燃蜡烛的密闭容器内，待蜡烛熄灭后将密闭容器放人培养箱；（萤将培养皿直接置于密闭容器内后放置在培养箱中；③培养皿不做处理直接放置在培养箱中。为能更真实反映样品中的乳酸菌数量，应选择的处理方案是____（填序号），理由是____。

Answer

使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 无菌水 45 稀释涂布平板 检验接种培养基是否受到污染（或培养基灭菌是否彻底） ① 乳酸菌为厌氧菌，氧气会抑制乳酸菌繁殖，方案①中蜡烛燃烧消耗氧气，使得乳酸菌是在近似无氧的条件下培养，因而更能真实反映样品中的乳酸菌数量

【解析】

1、配制乳酸菌分离培养基的步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。该培养基的化学成分包括碳源、氮源、水、无机盐四类营养成分，在培养该细菌的培养基中还需要添加维生素。培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。

2、分离微生物常用的方法：

①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。

②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。其中，稀释涂布平板法还可以用于对微生物进行计数。

（1）培养基制作完成后，需要进行灭菌，常用高压蒸汽灭菌锅进行高压蒸汽灭菌法灭菌。灭菌是指利用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

（2）梯度稀释时，先用无菌水将样品稀释10倍，即酸奶样品体积∶无菌水体积=1∶9，即可用无菌移液管吸取5mL酸奶样品加入盛有5×9=45mL无菌水的三角瓶中，使样品与水充分混匀。

（3）接种微生物的方法有很多，为统计乳酸菌的数量，宜采用接种方法为稀释涂布平板法，乳酸杆菌属于厌氧菌，接种后应在无氧条件下培养。在实验中还要设置未接种的对照组，在相同的条件下培养，观察是否有菌落产生，目的是检验培养基灭菌是否彻底。

（4）乳酸菌的代谢类型为异养厌氧型，方案①中蜡烛燃烧消耗氧气，使得乳酸菌是在近似无氧的条件下培养；方案②中密闭环境存在少量氧气，方案③没有处理，氧气充足，会抑制乳酸菌的繁殖，所以更能真实反映样品中的乳酸菌数量的是方案①。