Question

没吃完的西瓜会盖上保鲜膜放入冰箱储藏。研究表明，有时候盖上保鮮膜储藏的西瓜中的细菌种类和数目反而比没用保鲜膜的多。某生物研究小组用保鲜膜保存三天的西瓜表面的瓜瓤制备浸出液，研究细菌的种类和数量。

（1）配制的培养基一般都含有水、无机盐、____________。常采用____________法对培养基进行灭菌，灭菌前需将pH调至________________________。

（2）为了避免培养基污染，在培养过程中，需将平板____________（填正置或倒置）。为了观察浸出液中微生物的种类和数量，采用____________法接种。接种时，实验操作应在酒精灯火焰附近进行的原因是__________________。

（3）将1m L西瓜浸出液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0．1m L稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为26、28和27。据此可得出每升西瓜浸出液中的活菌数为____________，这种方法的统计结果比活菌的实际数目____________________________________。

Answer

碳源和氮源 高压蒸汽灭菌 中性或微碱性 倒置 稀释涂布平板 避免环境中微生物的污染 2.7×107 低

【解析】

（1）培养基的成分主要包括水、无机盐、碳源、氮源，培养微生物时还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求；

（2）微生物常见的接种的方法：①平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。②稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。

（1）培养基的成分一般包括水、碳源、氮源和无机盐,常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，灭菌前需将pH调至中性或微碱性。

（2）培养过程中，为了避免培养基被冷凝水污染，需要将平板倒置。将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，因此为了确定浸出液中细菌的种类和数量，一般采用稀释涂布法接种。为了避免环境中微生物的污染，接种时应该在酒精灯火焰附近进行。

（3）3个平板上的菌落数分别为26、28和27，平均值为27，每升西瓜浸出液中的活菌数=27×10×100×1000=2.7×107，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。