Question

乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

产乳糖酶微生物L的筛选→产乳糖酶微生物L的培养→乳糖酶的提取纯化→乳糖酶的固定化

（1）表的培养液pH均为7．0，若要筛选微生物L，则不能选择表中的___________培养液。

培养液	乳糖	乳糖酶	NaNO2	牛肉膏	K2HPO4	KCl	MgS4O•7H2O	FeSO4
A	25g/L				1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
B			3g/L		1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
C	25g/L	1ug/L		3g/L	1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L
D	25g/L		3g/L		1g/L	0．5g/L	1g/L	0．01g/L

（2）为了获得能产乳糖酶的微生物L的单菌落，可采用________法将初筛菌液接种在固体培养基上。

（3）扩大培养微生物L时，通过不断增加营养物质的比例________（可以/不可以）提高种群密度，分析说明原因________________________。

（4）常用____________________法固定化乳糖酶。在建立和优化乳糖酶固定化酶柱时，优化酶反应时间可通过___________来调节。

（5）下图是温度对乳糖酶的固化酶和游离酶活力的影响曲线，该曲线表明固化酶和游离酶的最适温度___________(从相同或不同选填)；低于或高于最适温度时，固化酶的酶活力___________(从低于、等于或高于选填)游离酶。

Answer

ABC 平板划线法或稀释涂布平板 不可以 扩大培养的液体培养基由于营养物质浓度增高，渗透压也增高，不利于细菌生长 物理吸附法或化学结合 控制（反应物）液体流速 相同 高于

【解析】

1、微生物的营养：碳源、氮源、水和无机盐；

2、微生物的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法；

3、从曲线图中固化酶和游离酶的最适温度重合，即二者的最适温度相同。低于或高于最适温度时，固化酶的酶活力均高于游离酶。

（1）分析题干信息可知，该实验的目的是筛选微生物L，因此所用的培养基应该是乳糖作为唯一碳源的培养基，且培养基的基本成分应包括碳源，氮源、水和无机盐，分析表格中的培养基的成分可知，D符合微生物L的培养要求，A培养基缺乏氮源，微生物不能生长；B没有碳源，微生物应为无法生长；C不是以乳糖为唯一碳源，牛肉膏也可以作为碳源，因此A、B、C不能用于对筛选微生物L的培养基。

故选ABC。

（2）为了获得能产乳糖酶的微生物L的单菌落，接种微生物时常用平板划线法或稀释涂布法，可将初筛菌液接种在固体培养基上。

（3）扩大培养的液体培养基由于营养物质浓度增高，渗透压也增高，不利于细菌生长，故扩大培养微生物L时，不能通过增加营养物质的比例提高种群密度。

（4）与细胞相比，酶的分子量较小，常用物理吸附法或化学结合法固定化乳糖酶。在建立和优化乳糖酶固定化酶柱时，优化酶反应时间可通过控制（反应物）液体流速来调节。

（5）据图分析可知，固化酶和游离酶的最适温度重合，该曲线表明固化酶和游离酶的最适温度相同；低于或高于最适温度时，固化酶的酶活力均高于游离酶。