Question

已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，某制药厂根据如图所示的流程图生产预防和治疗该传染病的单克隆抗体，请据图回答有关问题：

（1）单克隆抗体的特性有_______________，其制备过程运用了_________和_______________的动物细胞工程技术。

（2）上图中常用的化学促融剂是____________，假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成____________种类型的融合细胞，因此需要特定的HAT培养基筛选出杂交瘤细胞用于培养。已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断，淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖，骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，能无限分裂增殖，则HAT培养基中应添加____________才具有筛选杂交瘤细胞的作用。

（3）经克隆化培养和抗体筛选后获得的杂交瘤细胞具有的特点是_______________________。

（4）在大规模培养过程中，为保证细胞处于无菌无毒的环境，除了对培养液进行灭菌、添加一定量的抗生素外，还要_________________，以防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成伤害。

Answer

特异性强，灵敏度高，能大量制备 动物细胞融合 动物细胞培养 聚乙二醇（PEG） 三 氨基嘌呤 既能无限增殖，又能产生所需的专一抗体 定期更换培养液

【解析】

单克隆抗体的制备过程：

1.免疫动物：用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生B淋巴细胞。

2.细胞融合：将准备好的同系骨髓瘤细胞与B淋巴细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3.选择性培养：选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（S途径），不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（S途径），但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从淋巴细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶（S途径），并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化：在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。

5.单克隆抗体的大量制备：主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

(1)体内诱生法：在小鼠腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。

(2)体外培养法：将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。

（1）单克隆抗体具备特异性强，灵敏度高，可大量制备的特点，在制备过程中需应用动物细胞融合和动物细胞培养等动物细胞工程技术完成制备。

（2）动物细胞融合所应用促融剂为聚乙二醇，也可利用离心、振动、电激或灭活的病毒处理细胞，加速融合。融合后的细胞有三种：杂交瘤细胞、骨髓瘤-骨髓瘤细胞、淋巴-淋巴细胞。要筛选出杂交瘤细胞，需阻断骨髓瘤细胞能够进行的D途径，即在培养基中加入氨基嘌呤，阻止其增殖。

（3）杂交瘤细胞的特点：既能无限增值，又可以产生所需的专一抗体。

（4）想要保证细胞培养过程中的环境安全，不仅要加入适量抗生素抑制外来细菌，也需要定期更换培养液防止细胞代谢产物的积累对细胞造成伤害。