Question

某学校有三个兴趣小组，第一小组用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌；第二小组从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌单菌落；第三小组从土壤中筛选产脲酶细菌。请回答下列问题：

（1）第一小组分离纯化乳酸菌时，首先用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释的理由是____________________。分离纯化乳酸菌所用固体培养基中加入____________可中和产生的乳酸，分离纯化时选择具有透明圈的菌落作为候选菌。

（2）第二小组土壤采样后，通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，之后，在培养基中加入____________进行颜色反应直接筛选纤维素分解菌，该培养基从功能上看属于_________，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行_________的实验。

（3）第三小组选择培养基应该以__________为唯一氮源，鉴别培养基需添加__________作为指示剂。在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品0．1mL，培养一段时间统计菌落数量。该过程采取的接种方法是__________。

Answer

泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落 碳酸钙 刚果红 鉴别培养基 发酵产纤维素酶 尿素 酚红 稀释涂布平板法

【解析】

稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。

泡菜发酵的实验原理：（1）乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸。（2）利用乳酸菌制作泡菜的过程中会引起亚硝酸盐的含量的变化。温度过高、食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。

尿素为唯一氮源的培养基上，只有能分解尿素的菌才能以尿素作为氮源生长繁殖，不能分解尿素的菌因缺乏氮源无法生长繁殖，因此分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用尿素为唯一氮源的培养基进行分离，分解尿素的菌在分解尿素时产生氨气，使酚红指示剂显红色，所以要加入酚红指示剂进行鉴别。

对纤维素分解菌进行筛选的实验流程为:土壤取样—选择培养—梯度稀释 —将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上—挑选产生透明圈的菌落。

（1）分离纯化乳酸菌时，首先要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释。泡菜滤液中乳酸菌的浓度高，直接分离很难分离到单个菌落，因此需要对泡菜滤液进行梯度稀释；在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙可中和乳酸菌代谢过程中产生的乳酸且利于乳酸菌的识别。

（2）筛选纤维素分解菌一般用刚果红染料进行鉴定，为确定得到的是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验。

（3）第三小组要筛选尿素分解菌，应以尿素为唯一氮源，鉴别培养基需添加酚红作为指示剂（观察是否变红）；题干提到了稀释，因此这里的接种方法为稀释涂布平板法。