Question

硝基苯酚是工业污水中重要污染物，某研究小组欲从污水处理厂污泥中分离分解硝基苯酚的细菌。请回答下列有关问题：

（1）为了筛选污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配置培养基时应选择___________作为唯一碳源。从功能上来看，该培养基属于是________培养基。配制培养基时除需提供碳源、氮源、水和无机盐外，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质、___________的要求。

（2）该小组采用平板划线法分离分解硝基苯酚的细菌操作时应该注意的事项有：___________（填序号）。

①整个操作过程需要在酒精灯旁进行

②在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环

③在灼烧接种环之后，立刻进行划线

④在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线

⑤不要将最后一区的划线与第一区相连

⑥在划线操作结束时，不需要灼烧接种环

（3）若接种过程和培养过程均符合要求，结果却在培养基上观察到了不同形态的菌落（不考虑分解硝基苯酚的细菌存在多种变异类型），则产生这种现象的可能原因是：______________________；若培养基的配制、接种及培养等过程的操作均规范无误，则这些细菌所利用的碳源可能是___________，其代谢类型（同化作用）是___________。

（4）进行菌落数量统计时，要选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止___________。

Answer

硝基苯酚 选择 pH以及氧气 ②④⑤ 培养基的配制不符合要求（或培养基中还含有其他有机碳源，其他合理答案亦可给分） 空气中的CO2 自养型 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目

【解析】

微生物筛选培养的过程：

①取样：在微生物富集的环境中取样，如：想培养分解硝基苯酚的细菌，应在硝基苯酚含量较高的环境中进行取样。

②选择培养：利用选择培养基（含有特定氮源或碳源），保证要分离微生物生长但是抑制其他微生物生长。

③分离纯化：可以利用稀释涂布平板法或平板划线法将选择培养后的微生物接种培养，筛选鉴定，确定目标菌落，然后接种特定菌落微生物进行纯化培养。

培养基的成分：一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气等的要求。

（1）为了筛选污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配制培养基时应选择硝基苯酚作为唯一碳源，只有能分解硝基酚的细菌才能获取碳源进行繁殖。从功能上看，该培养基属于选择培养基。在配制培养基时除需提供碳源、氮源、水和无机盐这些主要营养物质外，培养还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。

（2）接种时需要在酒精灯火焰旁进行，①错误。

操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下次划线吋，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，②正确。

在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太髙，杀死菌种，③错误。

划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落，④正确。

划线时要注意不要将最后一区的划线与第一区相连，⑤正确。

划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者，⑥错误。

故选②④⑤。

（3）由于接种过程和培养过程均符合要求，却在培养基上观察到了不同形态的菌落，可能是培养基的配制不符合要求（还含有其他有机碳源），导致选择培养的微生物除目的微生物外，还有其他微生物。在培养基的配倒、接种及培养等过程的操作均规范无误的情況下，由于硝基苯酚是该培养基的唯一碳源，因此这些杂菌利用的碳源只能是空气中的CO2，其同化作用类型属于（化能）自养型。

（4）进行菌落数量统计吋，要选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。