Question

药物敏感试验简称药敏试验，旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感程度，以指导临床合理选用抗生素。纸片扩散法（Kirby-Bauer test）是药敏试验一种常用的方法，它将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取平板中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

（平板的制备）

（1）关于药敏试验所用的琼脂平板制备过程，正确的顺序是_______

A. 称量、溶解、定容、调pH、倒平板、灭菌

B. 称量、溶解、调pH、定容、倒平板、灭菌

C. 称量、溶解、定容、调pH、灭菌、倒平板

D. 称量、溶解、调pH、定容、灭菌、倒平板

（2）培养基的灭菌条件应该设定为__________

A. 0.05kg/cm²，62℃，15~30min    B. 0.05kg/cm²，121℃，15~30min

C. 1.05kg/cm²，62℃，15~30min    D. 1.05kg/cm²，121℃，15~30min

（测试菌接种）

（3）若使用纸片扩散法进行药敏试验，在平板制备及测试菌接种环节，无需使用的工具是________

（抑菌圈观察）

某研究小组将含有相同浓度抗生素I~IV的四个纸片分别贴放在生长有测试菌的琼脂平板上，在合适的温度条件下孵育16h，结果如图所示：

（4）MIC是药敏试验中评价抗生素药效的常用指标，其定义为某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度。根据上图的试验结果可知，对于该试验所用测试菌而言，抗生素I的MIC_________（选填“大于”“小于”或“等于”）抗生素III的MIC。

（5）在相关试验操作均严谨规范的情况下，在含有抗生素IV的纸片周围出现了较大的抑菌圈，抑菌圈中存在有若干个测试菌的菌落。试对上述现象的成因作出_____________________

Answer

C D D 大于 抗生素IV 对于野生型测试菌具有较强的抑制作用，但测试菌中已经出现能抵抗抗生素IV的抗性突变株

【解析】

1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基其基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板。
​2．纯化大肠杆菌（1）原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个单个菌落就是一个纯化的细菌菌落。（2）微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）培养基制备的基本过程为计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板，因此关于药敏试验所用的琼脂平板制备过程，正确的顺序称量、溶解、定容、调pH、灭菌、倒平板，C正确。
（2）培养基一般采用高压蒸汽灭菌，其灭菌条件一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min，而100kPa相当于1.05kg/cm2，D正确。
（3）ABC、该实验中，测试菌接种需要利用涂布平板的方法，因此首先需要利用培养皿倒平板，然后用涂布器涂布平板，而涂布器灭菌时需要酒精灯燃烧残余的酒精，ABC正确；
D、平板划线法需要使用接种环，该实验无需使用，D错误。
（4）MIC是药敏试验中评价抗生素药效的常用指标，其定义为某种抗生素对测试菌的最低抑制浓度。分析图解可知，抗生素Ⅰ的透明圈明显小于抗生素Ⅲ，因此对于该试验所用测试菌而言，抗生素I的MIC大于抗生素III的MIC。
（5）在相关试验操作均严谨规范的情况下，在含有抗生素IV的纸片周围出现了较大的抑菌圈，抑菌圈中存在有若干个测试菌的菌落。这种现象可能是由于抗生素IV 对于野生型测试菌具有较强的抑制作用，但测试菌中已经出现能抵抗抗生素IV 的抗性突变株。