Question

回答下列（一）、（二）小题

（一）回答与果酒和果醋制作有关的问题：

（1）欲纯化野生酵母，最简单的分离方法是__________；醋化醋杆菌的培养基由蛋白胨、酵母提取物和_________组成。

（2）培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法，影响其灭菌效果的因素有温度、压力、时间以及__________等；灭菌结束后，待高压锅或灭菌锅__________时打开锅盖。

（3）用铝箔将甲、乙、丙瓶上口盖住的原因是__________。

（4）将醋化醋杆菌培养物和适量的酒—水混合物混匀后，调pH至7．0，再与_________的锯末等吸附物混匀，进行发酵。乙瓶中________（有/无）二氧化碳产生。

（5）若用果汁酿造果酒，可添加_________使果胶彻底分解成半乳糖醛酸。

（二）猪繁殖与呼吸综合症是一种严重威胁我国养猪业发展的传染病，由PRRSV病毒引起。科学家制备出PRRSV-GP3蛋白的单克隆抗体可对该病进行诊断和治疗，制备过程如图所示。请回答下列问题：

（1）在GP3蛋白的单克隆抗体制备过程中，需要用纯化的GP3蛋白对小鼠进行多次免疫，若检测到小鼠血清中出现________，说明小鼠已经产生了相应的体液免疫过程，可以从小鼠_________内提取细胞甲。

（2）①过程为________，常用于介导的化学试剂为________。

（3）第二次筛选前，需先对细胞丙进行________培养，再通过________（填方法）筛选出细胞丁。

（4）单抗比一般抗血清优越得多，原因是________________。

Answer

划线分离法 甘露醇 灭菌材料和数量、锅内空气含量 压力与大气压相同时； 防治杂菌污染和挥发性物质挥发 灭菌 无 果胶酶和果胶甲酯酶 GP3抗体 脾脏 细胞融合 聚乙二醇 克隆 抗体检验 一般抗血清中的抗体是一群识别不同抗原部位的抗体混合物，而单抗识别抗原部位具有专一性

【解析】

（一）本实验的内容是制作果酒和果醋，所用的原料是葡萄或其他果汁。葡萄酒是酵母利用葡萄糖进行酒精发酵（乙醇发酵）的产物。酵母菌只有在无氧条件下才能进行酒精发酵，即将葡萄糖氧化成乙醇。若获得醋化醋杆菌的菌种，可先在液体培养基中培养繁殖，液体培养基的配方如下：蛋白胨、酵母提取物、甘露醇等；培养基需要高压灭菌法进行灭菌，并且灭菌后需要将各瓶口进行密封处理。

（二）主要是单克隆抗体制作过程，单克隆抗体是细胞工程中动物细胞融合的重要应用，与传统血清抗体相比，单克隆抗体的纯度高，特异性强，能够准确与PRRSV病毒进行诊断和治疗。其基本步骤：对小鼠进行免疫→提取B淋巴细胞→将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合→通过筛选、克隆化培养和扩大化培养、最终注入小鼠体内→从腹腔腹水中提取单克隆抗体。

（一）

（1）纯化分离野生型酵母菌，最常用最简单的方法就是划线分离法，得到较为纯化的酵母菌；根据配方培养醋化醋杆菌所用的液体培养基中含有酵母菌提取物、蛋白胨、甘露醇等。

（2）高压灭菌法的影响因素有：温度、压力、时间、灭菌产品的数量、锅内空气含量等因素，并且由于灭菌过程中锅内压力较大，为了防止压力过大造成的破坏，当灭菌结束后，等到锅内压力减小到外界大气压时，再打开锅盖。

（3）图中甲、乙、丙三瓶密封的主要作用：防止杂菌感染，另外同时也可以防止物质挥发。

（4）图中所示的过程为利用果酒产生果醋的过程，乙瓶为发酵瓶，酒—水混合物与灭菌后的锯末混合，便于醋化醋杆菌吸附和发酵，反应过程：C2H5OH+O2→CH3COOH+H2O，过程中没有CO2生成。

（5）若除去反应产品中的果胶，可以利用果胶酶和果胶甲酯酶可水解细胞壁中的果胶，将其分解为半乳糖醛酸。

（二）

（1）反复对小鼠进行同种抗原的接种过程，小鼠发生体液免疫并产生相应的GP3抗体，因此可以从免疫器官脾脏中获取能产生抗体的B淋巴细胞，即甲细胞。

（2）①过程将细胞甲和小鼠骨髓瘤细胞融合，通过聚乙二醇（PEG）完成诱导融合。

（3）融合后的杂交瘤细胞经过两次筛选，分别选出杂交瘤细胞和经过克隆培养后存活的能产生单一抗体的杂交瘤细胞。

（4）单克隆抗体的优势是特异性强，灵敏度高，同时可以大量制备，而一般的血清抗体纯度低，多种抗体同时存在，与相应蛋白质结合的特异性较小。