Question

脂肪酶能将白色的乳化油脂分解为甘油和脂肪酸（无色），微生物已经成为脂肪酶工业生产的主要来源。某研究小组欲用产脂肪酶的某种芽孢杆菌为材料进行诱变，筛选出脂肪酶高产菌株。请回答下列问题：

（1）土壤有“微生物的天然培养基”之称，你应该采集___________环境的土样，以获得原始菌种；为增加菌种数量可以进行___________，且培养基应中加入一定量的___________。

（2）原始菌株经诱变后，采用___________法将菌液接种在添加了乳化油脂的固体培养基上进行培养并获得单细胞菌落，通过比较___________筛选出脂肪酶高产菌株。

（3）高纯度的酶能显著提高催化效率，脂肪酶的化学本质是蛋白质，实验室常采用___________法分离纯化脂肪酶，此方法分离蛋白质时，相对分子质量___________的蛋白质先从色谱柱中洗脱出来；还可以根据脂肪酶和其他蛋白质分子的___________等差异，在电场中产生不同的迁移速度，从而分离脂肪酶。

Answer

富含油脂 选择培养 油脂 稀释涂布平板 菌落周围透明圈的大小 凝胶色谱法 较大 带电性质、分子大小、形状不同

【解析】

1．稀释涂布平板：将一定浓度，一定量的待分离菌悬液加到已凝固的培养基平板上，再用涂布器快速地将其均匀涂布，使长出单菌落而达到分离或计数的目的。不仅可以用于计算活菌数，还可以利用其在平板表面生长形成菌落的特点用于检测化学因素对微生物的抑杀效应。

2. 凝胶色谱法的原理：对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。

3.电泳法的原理：当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。也就是说，电场强度越大、电泳分子所携带的净电荷数量越多，其迁移的速度也就越快，反之则较慢。

（1）由于要筛选的是能够产脂肪酶的某种芽孢杆菌，应该采集富含油脂环境的土样，以获得原始菌种；为增加菌种数量可以进行选择培养，且为了增加能够产脂肪酶的某种芽孢杆菌的数量，培养基应中加入一定量的油脂。

（2）原始菌株经诱变后，采用稀释涂布平板法将菌液接种在添加了乳化油脂的固体培养基上进行培养可获得单细胞菌落，由于脂肪酶能将白色的乳化油脂分解为甘油和脂肪酸（无色），故通过比较菌落周围透明圈的大小可筛选出脂肪酶高产菌株。

（3）脂肪酶的化学本质是蛋白质，实验室常采用凝胶色谱法法分离纯化脂肪酶，此方法分离蛋白质时，分子较大的只能进入孔径较大的凝胶孔隙内，而分子较小的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长，故相对分子质量较大的蛋白质先从色谱柱中洗脱出来；还可以采用电泳法，根据脂肪酶和其他蛋白质分子的带电性质、分子大小、形状不同等差异，在电场中产生不同的迁移速度，从而分离脂肪酶。