Question

油轮泄漏会造成严重的环境污染，吸油菌可将原油分解为无机物，从而消除原油泄漏造成的海水污染。某科研小组欲筛选分离能高效降解海水中原油的菌株进行以下实验操作，回答下列问题。

（1）采集样品与选择培养：从___中采集样品；然后将样品适当稀释后接种于液体培养基中富集，从培养基的成分来看，应以 ___为碳源，从培养基的理化性质来看，应使用___水来配制该培养基。进行选择培养的目的是____。

（2）鉴别培养与筛选：将选择培养后的样品涂布培养于起选择或鉴别作用的培养基上，培养得到单菌落，有些单菌落周围出现较大的分解圈，有些单菌落虽然长势良好，但周围不出现分解圈。后者菌落出现的原因是___________

（3）微生物长势的测定：微生物数目的测定可以使用显微镜直接计数法和稀释涂布平板法，两种测定方法各有特点。与显微镜直接计数法相比，下列选项中属于稀释涂布平板法的特点是 ___（填序号）。

①操作简便快捷   ②操作复杂耗时长  ③测量活菌数准确度高  ④测量总菌数准确度较高

Answer

受原油污染的海水 原油 海（或与海水渗透压相同的盐） 增加吸油菌的浓度，以确保能够从样品中分离得到所需的吸油菌 这些菌落能够产生分解原油的胞内酶，且酶含量或活性较高 ②③

【解析】

欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其它碳源，不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存。分离纯化菌种时，需采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，使聚集在一起的细菌细胞分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈（透明圈）越大。

（1）欲筛选出能降解原油的菌株，从受原油污染的海水中采集样品。在筛选高效降解原油的菌株过程中，应将样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于选择培养基。从培养基的理化性质来看，应使用海水来配制该培养基。进行选择培养的目的是，增加吸油菌的浓度，以确保能够从样品中分离得到所需的吸油菌。

（2）培养得到的单菌落中的细菌都是能降解原油的，如果细菌降解原油的酶在细胞外，则菌落周围出现较大的分解圈。如果细菌降解原油的酶在细胞内，且酶含量高，则单菌落周围不出现分解圈。

（3）用稀释涂布平板法统计菌落数目时，操作复杂耗时长，测量活菌数目准确度较高。但是有些细菌靠在一起，形成一个菌落，这样统计的菌落数往往比活菌的实际数目少；显微镜直接计数法统计微生物数目时，操作简单，由于不能排除死细胞的数量，所以统计的数目往往偏高。用稀释涂布平板法于显微直接计数相比，特点是②③。