Question

下图表示某质粒载体，图2表示植物甲的抗旱基因，该基因两端分别包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种限制酶的酶切位点。据图回答下列问题：

（1）目前获取目的基因的常用方法有：①从_______________中获取目的基因；②利用__________扩增目的基因。

（2）若目的基因和质粒载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶处理后，两两连接对的产物有_________种类型。将上述连接产物导入无任何抗药性的宿主细胞中，再将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能正常生长的宿主细胞所含有的连接产物是__________________________________________________ 。实验中，为了防止目的基因和质粒载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时因选用的酶是_________________。

（3）为大量培养抗旱新品种植物，将基因表达载体构建完成后一般不直接导入农杆菌，而是先将其转入处于________的大肠杆菌中，导入大肠杆菌的目的是_______________________。

Answer

基因文库 PCR技术 3 载体--载体连接物(或质粒一质粒连接物) EcoR I和BamH I 感受态 获取大量重组质粒

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）目前获取目的基因的常用方法有：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增。

（2）将含有抗旱基因的DNA与该质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶处理后，两两连接的产物有3种，即含有耐旱基因的DNA与含有耐旱基因的DNA连接、质粒与质粒连接、含有耐旱基因的DNA与质粒连接。由图可知，构建基因表达载体时，四环素抗性基因会被破坏，因此将上述连接产物导入无任何抗药性的宿主细胞后，将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能正常生长的宿主细胞所含有的连接产物是载体-载体连接物（或质粒-质粒连接物）。酶切时应选用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ，形成不同的黏性末端，这样可以防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接。

（3）为大量培养抗旱新品种植物，将基因表达载体构建完成后一般不直接导入农杆菌，而是先将其转入处于感受态的大肠杆菌中，目的是为了获取大量重组质粒。