Question

EPO是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成。人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物。其过程如下：

请回答下列问题：

（1）从人体组织中提取EPO的mRNA，通过反转录得到__________，再通过PCR技术获得大量EPO基因。

（2）供体母鼠通常情况下每次排卵8～12枚，为使其超数排卵，需注射__________激素以排出更多的卵子，培养到______________________（时期）与获能的精子相遇时，精子首先发生__________反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精。

（3）①过程构建的基因表达载体，内部包括不可缺少的组成部分，其中__________能驱动基因的转录。

（4）采用__________________________技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，将受精卵移入发育培养液中继续培养。培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加__________、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及血清（血浆）等物质。

（5）当胚胎发育至____________________时期，向受体移植，为获得更多个转基因胚胎，要将__________进行均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。

Answer

cDNA 促性腺 减数第二次分裂 顶体 启动子 显微注射技术 维生素 桑椹胚或囊胚 内细胞团 性别鉴定

【解析】

1.获取目的基因的方法有基因文库法；PCR法；人工合成法。基因文库分为基因组文库和部分基因文库，其中部分基因文库包括cDNA文库，cDNA是依靠mRNA反转录得到的。

2.转基因动物培养一般包括体外受精、早期胚胎培养和胚胎移植：

（1）体外受精包括：①卵母细胞的采集：a.收集方法：给母畜注射促性腺激素使其超数排卵，然后冲卵；从屠宰场得到的废弃动物卵巢中采集卵母细胞；从活体卵巢中采集卵母细胞。

②精子的采集和获能：a.收集方法：手握法；电刺激法；假阴道法。b.获能方法：培养法（利用专用获能培养液）；化学诱导法（利用一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液）。

③体外受精：在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程。

（2）早期胚胎培养：在胚胎的发育培养液中需加入有机盐、无机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清（两盐、两素、两酸、一血清），以保证胚胎的正常生命活动。

（3）胚胎移植：一般将胚胎培养到桑葚胚或囊胚时期即可进行移植，在移植之前可以进行胚胎性别鉴定确定胚胎性别，也可以进行胚胎分割，增加胚胎数目，但是注意在分割时需要将胚胎的内细胞团均等分割，保证分割后胚胎发育正常。

（1）提取mRNA，再通过反转录方法得到的DNA分子并非完整基因，而是除去了内含子以后的基因，为cDNA。

（2）动物超数排卵是利用促性腺激素处理动物，得到动物卵母细胞后，需将细胞培育至减数第二次分裂时期以准备进行受精作用，精子在与卵母细胞接触时，首先发生顶体反应，穿越放射冠和透明带，头部进入卵母细胞，然后完成受精作用。

（3）基因表达载体包括：目的基因、启动子、终止子、标记基因。其中启动子位于基因的首端,是RNA聚合酶识别并结合位点；终止子位于基因的末端，终止转录；标记基因用来检测目的基因是否导入受体细胞。

（4）动植物将目的基因导入受体细胞的方法是不同的，动物采用显微注射法；植物采用农杆菌转化法、基因枪法或花粉管通道法。在早期胚胎培养时应在培养液中加入有机盐、无机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清（两盐、两素、两酸、一血清），以保证胚胎的正常生命活动。

（5）一般将胚胎培养到桑葚胚或囊胚时期即可进行移植，在移植之前可以进行胚胎分割，增加胚胎数目，但是注意在分割时需要将胚胎的内细胞团均等分割，保证分割后胚胎发育正常。也可以进行胚胎性别鉴定确定胚胎性别，确定是否进行移植。