Question

纤溶酶能分解血浆中的纤维蛋白，可用于治疗心脑血管栓塞，科研人员开展产纤溶酶细菌的分离及发酵产酶的研究。请回答下列问题：

（1）制作脱脂奶粉培养基用于目标菌的初筛需要先灭菌，培养基的灭菌方法是___________________。用无菌水将采集的样品进行___________________后，涂布于脱脂奶粉培养基平板上，培养后挑选具有溶圈的5个目标菌落进一步纯化。

（2）初筛得到的各菌株分别置于复筛液体培养基中，培养后将培养物置于______________（填低温、常温或高温）条件下离心，得到上清液。将上清液点加于血纤维蛋白平板上，测量血纤维蛋白分解形成的溶圈面积，结果如下表。

菌落编号	菌落直径（mm）	初筛溶圈直径（mm）	复筛后溶圈面积（mm^2）
1	2．76	9．74	45．48
2	3．64	6．50	187．22
3	3．40	18．64	0
4	4．94	12．46	104．57
5	4．54	10．21	72．13

初筛挑选具有溶圈的菌落，说明这些菌体分泌了蛋白酶。蛋白酶的作用是________________。上述菌落________________（填表中的菌落编号）中的是高产纤溶酶菌株，理由是________________。

（3）研究酶制剂用于治病时，需要对酶进行分离纯化。可采用________________（填方法）分离纯化蛋白质。

Answer

高压蒸汽灭菌 梯度稀释 低温 将奶粉中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸 2 菌落2对应的复筛的溶圈面积最大，说明菌落2的菌体分泌的纤溶酶的活性最大 凝胶色谱法

【解析】

1.统计菌落数目的方法：（1）稀释涂布平板法（间接），①当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌；②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。（2）利用显微镜直接计数。

2.实验室的灭菌方法有多种，不同的器具、物品应采用不同的灭菌方法。

3.鉴别培养基是用于鉴别不同类型微生物的培养基。在培养基中加入某种特殊的化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变化，可将该种微生物与其他微生物区分开来。

（1）培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。初筛的目的是挑选具有溶圈的目标菌落，需要用稀释涂布平板法接种，所以要先将样品进行梯度稀释，再涂布到平板上。

（2）提取酶需要在低温条件下进行，使酶保持活性。初筛时用脱脂奶粉作为培养基，菌落周围出现溶圈，说明菌体能够分泌蛋白酶将脱脂奶粉中的蛋白质分解。蛋白酶的作用是将脱脂奶粉中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸。菌落1～5均出现初筛溶圈，说明都可以分泌蛋白酶，蛋白酶中可能含有一些纤溶酶。进行复筛后，以血纤维蛋白作为底物，若存在纤溶酶，则血纤维蛋白被分解形成溶圈，且溶圈越大，说明菌体分泌的纤溶酶的活性越大。菌株2溶圈面积最大，说明菌落2的微生物能够产生纤溶酶，且活性最大，为高产纤溶酶菌株。

（3）纯化蛋白质的方法有凝胶色谱法、电泳、透析、密度梯度离心等方法。