Question

多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物质，污染土壤后，很难清除。研究发现，部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为消除这种污染，科研人员计划从被污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。请回答问题：

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品溶解稀释，接种到以_____为唯一碳源的培养基上。

菌落数   平板编号稀释倍数	1	2	3
10	420	495	393
100	45	57	51
1000	2	7	3

（2）对初步提取到的菌株要进行_____培养，一般接种操作方法有两种，其中之一是下图所示的_____法。

（3）将酵母菌溶液分别稀释 10 倍、100 倍、1000 倍。每个浓度都接种三个平板，每个平板均用_________接入 0．1mL 稀释菌液，该接种方法是_____。培养时，需将培养皿_____培养，以防冷凝水造成污染。经适当培养后，平板上的菌落如上表所示：据此可得出，每升菌液中酵母菌活菌数为_____个。

（4）若要长期保存提纯得到的菌种，可以采用_____的方法。

Answer

多氯联苯 纯化 平板划线 移液枪 稀释涂布平板法 倒置 5.1×107 甘油管藏

【解析】

微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经溶化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上，只有能分解多氯联苯的菌株才能在这样的培养基中生存。

（2）对初步提取到的菌株要进行纯化培养，一般操作方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法，图示是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

（3）每个平板用移液枪接入0.1mL稀释菌液，该接种方法是稀释涂布平板法。培养时，为避免培养基中的水分蒸发形成水滴到培养基而造成污染，所以需将培养皿倒置。对菌落进行计数时，一般选择菌落数在30~300的进行记数，求其平均值，因此选择稀释100倍的三个培养基进行计算，每升溶液中酵母菌活菌数=（45+57+51）÷3÷0.1×100×1000=5.1×107个/L。

（4）若要长期保存提纯得到的菌种，可以采用甘油管藏的方法。