乙型脑炎和伪狂犬病是猪的两种常见传染病。下图是利用基因工程技术生产能同时预防这两种病疫苗的流程图，其中PrM为乙型脑炎的特异性抗原基因，PK、gG、gD为伪狂犬病的主要抗原基因，TK为伪狂犬病的毒性基因，pgG为启动子，BamHⅠ和EcoRⅠ为两种限制酶，其识别序列及切割位点分别是G↓GATCC、G↓AATTC。请回答下列问题：
（1）过程①所需的酶有 __________和_________。下列四种引物中适用于过程①的一对引物是________。
P1：5'TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG3’
P2：5'CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG3’
P3：5'TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG3’
P4：5’GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG3’
（2）过程②所需的酶有___________。过程③中要用Ca2+处理大肠杆菌，其目的是___________。
（3）重组伪狂犬病毒中不带TK基因的优点是_______________。
（4）将获得的病毒疫苗注射到猪体内，一方面病毒中抗原基因在猪细胞中大量表达，诱导猪获得_______免疫；另一方面______________，使得病毒投苗具有用量小、作用更持久等优点。
为研究肝癌致病机理，科研工作者利用下图所示的差异杂交法和基因工程获取相关癌基因以作进一步研究。请据图回答问题：
（1）图1中，A过程需要用__________酶，D过程需要回收__________（填“未杂交”或“杂交分子”）的含32P的cDNA单链，继而通过人工合成，获得__________， 并用其构建基因文库。
（2）从图1构建的基因文库中获取的目的基因，一般还需进行人工改造后才能用于基因表达载体的构建，改造内容除了在基因两端添加限制酶的识别序列外，还需添加__________，以便其随载体导入到受体细胞后，能正常调控表达过程。
（3）上图2为改造后的目的基因。图3为两种质粒，其中Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，其表达产物可使底物X-Gal呈蓝色。EcoRⅠ（0.7Kb）、NotⅠ（1.2Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离（1kb=1000个碱基对）。
①图3中能作为载体的最理想的质粒是__________（填“X”或“Y”），用选定的质粒与图2的目的基因构建基因表达载体时，应选用的限制酶是__________。为筛选出成功导入目的基因的受体细胞，培养基中应适量添加__________。
②若用EcoRⅠ完全酶切上述①中获得的重组质粒，并进行电泳观察，可出现四种长度不同的片段，其长度分别为1.7kb、5.3kb、__________。
某科研小组采用 80℃水浴熔化海藻酸钠，固定黑曲霉孢子（含β-葡萄糖苷酶），并进行相关催化实验，请分析回答问题。
（1）此实验过程中采用 80℃水浴代替_____加热法熔化海藻酸钠，其优点是能准确控制温度，融化过程不会出现焦糊且融化时间短。熔化的海藻酸钠加入黑曲霉孢子悬浮液前一定要进行_____处理，海藻酸钠的最终质量分数需控制在 3%，原因是______________。
（2）实验过程中，初形成的凝胶珠放在_____溶液中静置 30min，目的是形成稳定的网状凝胶结构。
（3）β-葡萄糖苷酶能催化大豆苷水解为大豆苷元，pH 和温度对游离孢子和固定化凝胶珠中 β-葡萄糖苷酶活性影响的结果如图所示，由图可知：研究 pH 和温度对葡萄糖苷酶活性影响时，温度和 pH 应分别控制为_____、_________；与游离孢子相比，固定化凝胶珠中 β-葡萄糖苷酶的 pH 适宜范围会_________，热稳定性会 __________。
转化率=豆苷含量- 反应后大豆苷含量/反应前大豆苷含量×100
处理温度/℃ | 转化率 | |
游离孢子 | 固定化凝胶珠 | |
30 | 100 | 100 |
40 | 99 | 100 |
50 | 98 | 99 |
60 | 65 | 98 |
70 | 29 | 92 |
80 | 5 | 50 |
90 | 0 | 10 |
多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物质，污染土壤后，很难清除。研究发现，部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为消除这种污染，科研人员计划从被污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。请回答问题：
（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品溶解稀释，接种到以_____为唯一碳源的培养基上。
菌落数 平板编号稀释倍数 | 1 | 2 | 3 |
10 | 420 | 495 | 393 |
100 | 45 | 57 | 51 |
1000 | 2 | 7 | 3 |
（2）对初步提取到的菌株要进行_____培养，一般接种操作方法有两种，其中之一是下图所示的_____法。
（3）将酵母菌溶液分别稀释 10 倍、100 倍、1000 倍。每个浓度都接种三个平板，每个平板均用_________接入 0．1mL 稀释菌液，该接种方法是_____。培养时，需将培养皿_____培养，以防冷凝水造成污染。经适当培养后，平板上的菌落如上表所示：据此可得出，每升菌液中酵母菌活菌数为_____个。
（4）若要长期保存提纯得到的菌种，可以采用_____的方法。
图1为某同学设计的用于制作果酒和果醋的发酵装置。图2为某研究小组的同学在对杨梅酒和杨梅醋的生产工艺进行考察后，绘制出的基本工艺流程图。请据图回答：
（1）图示发酵过程中所需的酵母菌可以从自然界中分离出来，要得到较纯菌种，应配制____培养基(按培养基的功能分)，常采用____法对培养基进行灭菌。然后用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种。
（2）用图1装置制作果酒过程中，要关闭____（“充气”或“排气”）管上的夹子。
（3）用图1装置制作果酒过程中，因某一步骤操作失误导致发酵瓶瓶塞被冲开，该操作失误是____。对该装置进行的改进是____。
（4）图2中甲罐顶上的排气管被设计成了弯曲状的管，其目的是____。发酵一定时间后，观察到发酵罐内液面不再有____产生，说明发酵基本完毕。
（5）在制备杨梅醋过程中，乙罐内先填充经灭菌处理的木材刨花，然后加入含____菌的培养液，使该菌附着在刨花上，再让甲罐中发酵完毕的杨梅酒流入乙罐进行杨梅醋发酵。
下列有关实验操作流程的叙述中，正确的是（ ）
A.腐乳制作：豆腐长毛霉-加盐腌制-加卤汤装瓶-密封腌制
B.血球计数板的使用：盖盖玻片-滴培养液-等待沉降-镜检计数-刷洗
C.果酒果醋制作：挑选葡萄-冲洗-榨汁-果醋发酵-果醋-酒精发酵-果酒
D.基因工程：获取目的基因-构建表达载体-导入受体细胞-目的基因的检测与鉴定
