Question

花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。

据图回答下列问题：

（1）过程①所需的酶是_____。过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体_____的存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。

（2）下图是用该引物对双亲及再生植株 1—4 进行 PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株 1—4 中一定是杂种植株的有_____。

（3）培育抗黑腐病杂种植株的技术称为_____，原理为_____。该技术中与 PEG 效果相同的诱导法还有_____（填两项）。

（4）植物组织培养技术基本操作的正确顺序是_____（填序号）。

①外植体消毒   ②制备 MS 培养基   ③接种    ④培养   ⑤栽培    ⑥移载

A．①→②→③→④→⑤→⑥    B．②→①→③→④→⑤→⑥ C．②→①→③→④→⑥→⑤    D．①→②→③→④→⑥→⑤

Answer

纤维素酶和果胶酶 叶绿体 1、2、4 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 离心、振动、电激 C

【解析】

分析题图：图示为采用植物体细胞杂交技术获得抗黑腐病杂种植株的流程图，其中①表示采用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除细胞壁的过程；②表示诱导原生质体融合的过程；脱分化形成愈伤组织，再分化长成植株，最后对杂种植株进行接种黑腐病菌筛选出具有高抗性的杂种植株。

（1）植物体细胞杂交技术的原理是细胞膜的流动性和细胞全能性。过程①用纤维素酶和果胶酶处理获得原生质体。用于融合的两个细胞，一个是黑芥苗的叶肉细胞，一个是花椰菜的根部细胞，其中供体细胞特有的结构是叶绿体，因此可通过光学显微镜观察叶绿体的有无，作为初步筛选杂种细胞的标志。

（2）据图判断，再生植株1、2、4中同时含有花椰菜和黑芥的基因，所以1—4 中一定是杂种植株的有1、2、4。

（3）培育抗黑腐病杂种植株的技术称为植物体细胞杂交，原理为细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。该技术中与 PEG 效果相同的诱导法还有离心、振动、电激等。

（4）植物组织培养技术基本操作的正确顺序是②制备MS 培养基→①外植体消毒→③接种→④培养→⑥移载→⑤栽培，故选C。