Question

如图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图回答下列问题：

（1）甲装置中，B是血红蛋白溶液，则A是____________。乙装置中，C溶液的作用是___________。

（2）通过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样品进一步________。

（3）在血红蛋白的提取和分离实验中有以下操作：

①实验时要对采集到的血液中的红细胞进行洗涤，其主要目的是________________。

②在蒸馏水和________的作用下，红细胞会破裂释放出血红蛋白。

③将释放出的血红蛋白收集到透析袋中透析，这是样品的______，而透析的目的是______。

（4）用乙装置分离血红蛋白，待___________________________时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。实验最后经过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行________。

Answer

磷酸缓冲液 洗脱血红蛋白（洗脱） 纯化 去除杂蛋白 甲苯 粗分离 去除样品中相对分子质量较小的杂质 红色的蛋白质接近色谱柱底端 纯度鉴定

【解析】

1、蛋白质的提取和分离：

（1）原理：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。

（2）用磷酸缓冲液处理的目的是让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能。

（3）分离血红蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，经过中速长时离心后，可明显看到试管中溶液分为4层，从上往下数，第1层为甲苯层，第2层为脂溶性物质的沉淀层，第3层为血红蛋白水溶液，第4层为杂质沉淀层。

（4）气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。

2、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：

（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白溶液；

（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析；

（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质；

（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

3、电泳法是利用待测样品中各种分子带电性质的差异和分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离或鉴定。

（1）透析是将血红蛋白溶液装入透析袋，放入A磷酸缓冲液。乙装置中C是磷酸缓冲液，溶液的作用是洗脱血红蛋白。

（2）通过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样品进一步纯化。

（3）在血红蛋白的提取和分离实验中有以下操作：

①实验时要对采集到的血液中的红细胞进行洗涤，其主要目的是去除杂蛋白；②在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞会破裂释放出血红蛋白；③将释放出的血红蛋白收集到透析袋中透析，这是样品的粗分离，而透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质。

（4）用乙装置分离血红蛋白，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集。实验最后经过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定。