Question

天然玫瑰因缺少控制合成蓝色色素的基因B而不能开蓝色花。科学家从开蓝色花的矮牵牛中了基因B后，利用生物工程技术培育出了开蓝色花的玫瑰。下图为该育种过程的操作流程。

注：Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，Tet^r表示四环素抗性基因。外源DNA插入到Amp^r或Tet^r中会导致相应的基因失活。限制酶EcoRⅠ、HindⅢ和BamHⅠ的识别序列及切割位点均不相同。

请回答下列问题：

（1）图中将基因B导入玫瑰细胞的方法称为_____________。选择Ti质粒作为运载体的原因是Ti质粒上的__________可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。

（2）在构建重组Ti质粒时，应选用图中的_________(限制酶）。有人用该种限制酶分别切割Ti质粒和基因B后混合，加入DNA连接酶进行反应，用得到的混合物直接转化细菌甲。结果得到了四种细菌甲：未被转化的、含环状基因B的、含Ti质粒的和含重组Ti质粒的。筛选目的细菌甲时，先用含_________的固体培养基培养，不能生长的是_________的细菌甲；然后再将能生长的细菌甲接种到含_________的固体培养基中，目的细菌甲在此培养基中___________(填“能”或“不能”）生长。

（3）由玫瑰韧皮部细胞形成组织乙的过程，实质是___________的过程。

Answer

农杆菌转化法 T−DNA BamHⅠ 氨苄青霉素 未被转化的和含环状基因B 四环素 不能 让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞

【解析】

1、获取目的基因（从基因组文库中获取或、利用PCR技术扩增目的基因），2、基因表达载体的构建（这也是基因工程的核心），3、将目的基因导入受体细胞，4、目的基因的检测与鉴定 （DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原--抗体杂交）。

（1）将目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，将目的基因导入Ti质粒的T---DNA上，因为T---DNA能够转移到受体细胞染色体DNA上。

（2）在构建重组Ti质粒时，应选用图中的BamHⅠ，这样构建的基因表达载体，含有标记基因氨苄青霉素抗性基因，而不含四环素抗性基因，在含有氨苄青霉素的固体培养基培养，能生长；而在含有四环素的固体培养基中不能生长，这样才能选出含有目的基因的重组质粒。如果用HindⅢ，不能判断是否将目的基因插入到质粒中，所以应该用BamHⅠ切割目的基因和Ti质粒。

（3）由图可知组织乙是愈伤组织，玫瑰韧皮部细胞形成组织乙就是脱分化形成愈伤组织的过程，其实质是让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞。