Question

H1NI为单链RNA病毒，感染人类会引发甲型流感。对H1N1进行基因组测序，发现HA基因是该病毒的一种特征基因。可通过检测HA基因来检测待测标本中H1N1的含量，过程如下图所示。回答下列问题。

（1）对H1N1进行基因组测序是测定RNA的__________序列。

（2）在过程①和②中，需分别向反应体系加入_________酶和____________酶。

（3）过程②中对HA基因对应的cDNA序列进行扩增，需设计_____种引物。反应体系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是____________________。

（4）反应体系中含有荧光物质，每扩增形成一条DNA链，就会出现一定强度的荧光信号。现欲检测两个标本中H1N1的含量，可在荧光强度达到某一设定值时，观察比较两个反应体系扩增循环的次数，若某个标木的循环次数较少，则其H1N1含量较____________。

（5）检测HA基因还可以采用分子杂交技术。制备用放射性同位素标记的、与A的基因互补的核酸序列作为_____与待测标本中提取的总RNA杂交，若观察到_____，则表明标本中存在HA基因。

Answer

核糖核苷酸 逆转录 Taq 2 提供反应所需的原料和能量 多 探针 杂交带

【解析】

核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），核苷酸是核酸的基本单位。脱氧核苷酸是脱氧核糖核酸的基本单位，核糖核苷酸是核糖核酸的基本单位。脱氧核苷酸由碱基、脱氧核糖和磷酸构成。其中碱基有4种：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。DNA双链的碱基互补配对的原则为A－T、G－C。DNA在复制时，以亲代DNA的每一个单链作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一个亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制。PCR是利用DNA在体外95℃高温时变性会变成单链，低温（经常是60℃左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72℃左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

（1）RNA的基本单位是核糖核苷酸，因此对H1N1进行基因组测序是测定RNA的核糖核苷酸序列。

（2）过程①为逆转录，过程②为PCR，需分别向反应体系加入逆转录酶和Taq酶（DNA聚合酶）。

（3）dATP dGTP dTTP dCTP这四种都是都是合成DNA的原料。同时，它们所携带的高能磷酸键，也可以为反应提供能量。

（4）PCR扩增过程中每扩增形成一条DNA链，就会出现一定强度的荧光信号，随着循环次数的增加，荧光信号逐渐积累，当达到设定的荧光强度时，PCR反应停止，此时可根据PCR扩增仪上显示的循环次数，判断病毒的含量。达到设定的荧光强度时的循环次数较少，待测标本中H1N1含量较多。

（5）分子杂交的原理是碱基互补配对，用放射性同位素标记的、与A的基因互补的核酸序列作为探针，若标本中存在HA基因（本质为RNA），则将标本中的RNA提取出来，就能找到与探针结合的杂交带。