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单克隆抗体在诊断和治疗中具有广泛的应用。已知一般细胞的DNA合成途径有起始合成途...

单克隆抗体在诊断和治疗中具有广泛的应用。已知一般细胞的DNA合成途径有起始合成途径和中间合成途径两种,氨基蝶呤(A)可以阻碍起始合成途经,次黄嘌呤(H)及胸腺嘧啶核苷(T)则是中间合成途径所必需的物质。骨髓瘤细胞只有起始合成途径。在HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)及胸腺嘧啶核苷(T)。下面是制备单克隆抗体的基本步骤:

步骤1:对小鼠多次注射特定抗原,制备淋巴细胞。

步骤2:细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养。最后一次免疫后第3天制备脾细胞悬液;筛选出途径缺失的骨髓瘤细胞,于对数生长期(又称指数生长期,即细胞以指数形式增加)制备骨髓瘤细胞悬液;取适量的脾细胞与骨髓瘤细胞进行混合,对它们进行诱导融合处理;用HAT培养基对处理后的细胞进行培养。

步骤3:二次筛选。

步骤4:大规模培养杂交瘤细胞,批量生产单克隆抗体。

回答下列问题:

1)步骤1中对小鼠多次注射特定抗原的目的是________________________;实验所需淋巴细胞可由________________细胞增殖分化而来。

2)于对数生长期制备骨髓瘤细胞悬液的原因是________________________________;为使HAT培养基上只有杂交瘤细胞可以存活,步骤2中应填________

3)步骤3中二次筛选可通过________________________法进行目的抗体的检测,筛选出________________细胞。

4)在体外对杂交瘤细胞进行克隆化培养时,为维持无菌无毒的环境,应进行的操作是_______________________________________________________________________。实验发现,在杂交瘤细胞的体外培养过程中,加入饲养层细胞比不加的生长要好,可能的原因是________________________________________

 

增加相应B淋巴细胞的数量 B细胞和记忆 对数期的细胞增殖速率较快 中间合成 抗原—抗体杂交 目的抗体检验呈阳性的杂交瘤(能够分泌目的抗体的杂交瘤) 对培养液和所有培养用具进行无菌处理,在培养液中加入一定量的抗生素、定期更换培养液 饲养层细胞可以产生一些促生长因子 【解析】 1.动物细胞培养条件 (1)无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害; (2)营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因子等)血清和血浆 (提供细胞生长必须的营养成份); (3)温度和pH(36.5±0.5℃,7.2~7.4); (4)气体环境(95%的空气+5%CO2的混合气体)其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定。 2.单克隆抗体制备的原理: B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够增殖、分化形成分泌特定抗体的效应B细胞。B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种杂交瘤细胞既能无限增殖,又能分泌特异性抗体,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。 (1)制备单克隆抗体的前提是首先获得效应B细胞,为了获得更多的相应的B淋巴细胞,实验中需要对小鼠多次注射特定抗原;实验所需的效应B细胞可由B细胞和记忆细胞在抗原的刺激下增殖分化而来。 (2)因为处于对数期的细胞增殖速率较快,适应新的培养环境的能力强,因此选择处于对数生长期制备骨髓瘤细胞悬液用于实验;一般细胞的DNA合成途径有起始合成途径和中间合成途径两种,而骨髓瘤细胞只有起始途径,为了将杂交瘤细胞选出来,在步骤2中应选择中间合成途径缺失的骨髓瘤细胞,在HAT培养基上杂交瘤细胞能利用效应B细胞的中间途径进行增殖。因为在HAT培养基中阻断了DNA合成的起始途径,骨髓瘤细胞以及骨髓瘤细胞自融的细胞因为起始途径被阻断而无法增殖。效应B细胞以及效应B细胞互融的细胞没有增殖能力。 (3)步骤3中二次筛的目的是要筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞,通常可根据抗原抗体能够发生特异性结合的方法来检测,即用抗原—抗体杂交法进行目的抗体的检测,从而将能够分泌目的抗体的杂交瘤细胞筛选出来。 (4)动物细胞培养需要在无菌、无毒的环境中进行,因此,在体外对杂交瘤细胞进行克隆化培养时,需要对培养液和所有培养用具进行无菌处理,并同时在培养液中加入一定量的抗生素以维持无菌、无毒环境,具体培养过程中还需要定期更换培养基。实验中发现,在杂交瘤细胞的体外培养过程中,加入饲养层细胞比不加的生长要好,根据动物细胞培养的条件可知,加入饲养层细胞生长好的可能原因是饲养层细胞可以产生一些促生长因子。
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考点分析:
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大肠杆菌是寄生于人和动物肠道中的细菌,其代谢产物能与染料伊红美蓝反应,使菌落呈黑色。某生物科技小组的同学拟对某地严重污染的水体中细菌种类、大肠杆菌数目进行调查,实验及流程如下:

实验一:滤膜法测定大肠杆菌数目:

用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝培养基(EMB培养基)上培养→统计菌落数目。

实验二:大肠杆菌的培养和分离:

配制培养基→灭菌→扩大培养→划线分离和培养→菌种保存。

回答下列问题:

1)实验一中,过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶,通过________方法进行灭菌处理。统计大肠杆菌菌落时应选择颜色为________的菌落进行计数。

2)实验二中,“划线分离和培养”前应对样品进行________,这样,“划线分离和培养”过程后,一个菌体便会形成一个________,这种分离方法是纯化菌种的常用方法。

3)实验一和实验二中均用到固体培养基,配制培养基过程中,除了加入特定的营养物质以外,还要加入一定量的氯化钠,以维持培养基的________。获得纯净培养物的关键是________,所以对所用培养基均需进行灭菌处理,为检测灭菌是否彻底,应进行的操作是________________________;一般对所需菌种长期保存可采用________的方法。

 

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食蚜蝇的体色有单一暗色和斑纹彩色,由等位基因A/a控制,其眼形有眼合生和眼离生,由等位基因B/b控制。让斑纹彩色眼合生的雌雄食蚜蝇进行交配,产生的F1中斑纹彩色:单一暗色=31,眼合生:眼离生=31,且有单一暗色眼离生食蚜蝇。选择F1中眼合生雌食蚜蝇与一纯合眼合生雄食蚜蝇进行杂交,后代出现眼离生雄食蚜蝇。不考虑XY染色体同源区段及交叉互换,回答下列问题:

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2)试从亲本和F1中选择合适的个体作为实验材料,设计遗传实验来判断上述两对基因的遗传是否遵循基因的自由组合定律,将该实验补充完整:

①实验思路:选择亲代中的________食蚜蝇与F1________食蚜蝇多次交配,观察并统计子代表现型及比例。

②实验结论:若后代表现型及比例为__________________________________________________=1111时,则说明两对等位基因的遗传遵循基因的自由组合定律;若后代表现型及比例为________________时,则说明两对等位基因的遗传不遵循基因的自由组合定律。

3)若实验证明两对等位基因的遗传遵循基因的自由组合定律,让F1中斑纹彩色眼合生食蚜蝇自由交配,则F2斑纹彩色眼合生个体中纯合子所占的比例为________;在F2食蚜蝇中B的基因频率为______________

 

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历史上的塞罕坝水草丰茂、森林茂密、禽兽繁集。从1863年开围放垦至解放初期,呈现飞鸟无栖树,黄沙遮天日的荒凉景象。1962年之后,两代知青用四十年青春和汗水,营造起万顷林海,成为河的源头、云的故乡、花的世界、林的海洋、珍禽异兽的天堂,这是人类改造自然的伟大创举。回答下列问题:

11863~1962年间,塞罕坝的森林群落被破坏,表明生态系统的________________具有一定限度。1962年之后,塞罕坝沙漠生物群落发生了________演替,以上可说明人类活动可改变群落演替的________

2)在塞罕坝的自由放牧区,兔子、牛羊和平共处,狼与狐正常出没。如图为能量流经兔子这一营养级的示意图,其中G表示流入狐所在营养级的能量,A表示兔摄入的能量,则兔用于自身生长、发育和繁殖的能量由图中________表示。伴随D出现的碳元素存在形式变化是________________。若一段时间内,兔子数量增长,则必须满足的关系是________________(用A~G及相关数学符号表示)。

3)如今的塞罕坝具有丰富的动植物资源、优美的自然风光和优越的气候条件,成为大量游客休闲观光的打卡之地,这主要体现了生物多样性的________________价值。

 

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常见的糖尿病有Ⅰ型糖尿病和Ⅱ型糖尿病。Ⅰ型糖尿病患者胰岛B细胞受损,体内胰岛素含量缺乏;Ⅱ型糖尿病患者体内胰岛素合成分泌正常,但不能正常发挥作用。回答下列问题:

1)临床上医生常通过检测体液(血浆)中胰岛素含量来判断某人是否患Ⅰ型糖尿病,依据是________________

2)Ⅰ型糖尿病患者血糖含量很高,但偶尔会出现饥饿感、心慌等类似低血糖症状。从血糖利用的角度分析,可能的原因是________________________________________

3)某科学家利用高脂饲料喂养健康实验小鼠,培育出若干只Ⅱ型糖尿病小鼠,探究某药物X对Ⅱ型糖尿病的治疗效果。

实验材料:Ⅱ型糖尿病小鼠若干只、快速血糖检测仪、质量分数为50%的葡萄糖溶液、注射器、药物X、生理盐水。

实验步骤如下:

1步:将实验小鼠随机均分为两组,分别编号为甲、乙,先用快速血糖检测仪测量各组小鼠的血糖含量,再分别同时注射________________________________________

2步:给甲组小鼠注射一定量的用生理盐水配制的药物X溶液,给乙组小鼠注射________________

3步:在相同且适宜的条件下培养2h,然后用快速血糖检测仪检测两组小鼠的血糖含量并记录。

预期结果及结论:

①若________________________,则说明药物X能治疗Ⅱ型糖尿病;

②若________________________,则说明药物X不能治疗Ⅱ型糖尿病。

 

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如图为某高等植物叶肉细胞在光照条件下发生的物质和能量变化过程示意图。回答下列问题:

1)物质a________,突然停止光照,短时间内叶肉细胞中C5相对含量的变化趋势是________;黑暗条件下,物质b生成CO2的场所是________________

2)在光照适宜条件下,给该植物提供适量的H218O,一段时间后在生成的糖类中检测到放射性,则18O的转移途径是________________________________________(用文字和箭头表示)。

3)已知dc分别表示不同气体进出细胞的过程,若外界的光照强度恰好是该植物的光补偿点(植株的光合速率等于呼吸速率时的光照强度),此时植株的叶肉细胞只存在________(填cdcd),原因是________________________________________

 

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