Question

将重组质粒导入大肠杆菌后，需接种在培养基培养，以便进一步筛选目的菌株，培养基成分如下：

牛肉膏	蛋白胨	NaCl	X	抗生素	水
0．5g	1g	0．5g	2g	适量	定容至100mg

（1）上述培养基中应加入的物质X是___________，利用培养基分离纯化目的菌株，可用_______（填“平板划线法”、“稀释涂布平板法”、“平板划线法或稀释涂布平板法”），理由是__________________。接种后，应将培养基放入37°C恒温箱中倒置培养，倒置的目的是__________________。

（2）可将平板上的单个菌落分别挑取并接种在_____________（填“固体”或“液体”）培养基中扩大培养。在接种过程中应注意的无菌操作有：_______（至少写2个）。

Answer

琼脂 平板划线法或者稀释涂布平板法 这两种方法都能够将聚集的菌种逐步稀释分散成单个细胞，可以在培养基表面形成单个菌落 既可防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发 液体 在酒精灯火焰旁进行；操作者的手要用酒精消毒（或者接种环在蘸取菌落之前要灼烧灭菌；在超净工作台中进行；培养皿皿盖打开一条缝隙，操作完要迅速关闭）

【解析】

接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。接种的目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，并在培养基表面形成单个细菌繁殖而成的子细胞群体—菌落。

（1）分离纯化菌种的培养基应为固体培养基，所以上述培养基中应加入的物质X是琼脂。由于平板划线法或者稀释涂布平板法都能够将聚集的菌种逐步稀释分散成单个细胞，可以在培养基表面形成单个菌落，所以分离纯化目的菌株，可用平板划线法或稀释涂布平板法接种。接种后，应将培养基放入37°C恒温箱中倒置培养，倒置的目的是既可防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发。

（2）液体培养基中菌体和营养物质可以充分接触，菌种的扩大培养一般是将菌种接种在液体培养基中。在接种过程中应保证无菌操作，如接种应在酒精灯火焰旁进行；操作者的手要用酒精消毒（或者接种环在蘸取菌落之前要灼烧灭菌；在超净工作台中进行；培养皿皿盖打开一条缝隙，操作完要迅速关闭）等。