Question

为增加油葵种子中的含油量，科学家尝试将花生中的酶A基因导入油葵细胞，获得转基因油葵新品种。

（1）为获取目的基因，可从花生细胞中提取______________，经逆转录形成____________。以此为模板通过_____________扩增目的基因。

（2）构建重组DNA分子需用载体，常见的载体有____________；构建好的载体一般都包括以下几个部分：启动子、目的基因和__________________

（3）剪取油葵的叶片放入浸染液中，一段时间后筛选获得转基因油菜细胞。最后经过___________培育成转基因油葵植株，此种技术的原理是___________________。

（4）研究发现，如果将该酶A的20位和24位氨基酸变为半胱氨酸其催化能力将提高2倍。通过蛋白质工程对酶A进行改造，所需步骤有：蛋白质的结构和功能分析→_______→________→将改造后的酶A基因导人受体细胞→获得所需的蛋白质。

（5）经过种植转基因油葵发现，虽然转基因油葵种子中含油量上升，但是抗灰霉菌的能力丢失，其原因是_______。

Answer

mRNA cDNA PCR技术 质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物等 终止子和标记基因 植物组织培养技术 植物细胞的全能性 蛋白质的结构设计 酶A基因的定向改造 抗灰霉菌基因没有表达（或丢失等）

【解析】

基因工程基本操作顺序：目的基因获取（从基因文库中获取、利用PCR技术扩增、人工合成），表达载体的构建（启动子+目的基因+标记基因+终止子），将目的基因导入受体细胞（植物细胞用农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法，动物细胞用显微注射法，微生物细胞用感受态细胞法），目的基因的检测与鉴定（导入检测用DNA分子杂交技术，转录检测用分子杂交技术，翻译检测用抗原——抗体杂交法）。蛋白质工程过程：预测蛋白质的功能→设计预期蛋白质的结构→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列→合成DNA→表达出蛋白质。

（1）逆转录需要从花生细胞中提取mRNA为模板，以脱氧核苷酸为原料合成cDNA；通过PCR技术扩增目的基因。

（2）构建重组DNA分子需用载体，常见的载体有质粒、动植物病毒、λ噬菌体的衍生物等；构建好的载体一般都包括启动子、目的基因、标记基因和终止子。

（3）得到转基因油菜细胞后，要培育成转基因油葵植株，需要用植物组织培养技术才能实现，该技术的原理是植物细胞的全能性。

（4）通过蛋白质工程对酶A进行改造的步骤为：蛋白质的结构和功能分析→蛋白质的结构设计→酶A基因的定向改造→将改造后的酶A基因导人受体细胞→获得所需的蛋白质。

（5）抗灰霉菌的能力丢失的原因是抗灰霉菌基因没有表达（或丢失）。