Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）回答下列《生物技术实践》有关问题：

（1）高压蒸汽灭菌锅灭菌，开始加热时要打开排气阀、关闭安全阀，其目的是为了_________，以避免锅内达不到预设的温度或压力。

（2）葡萄酒呈现深红色的原因是_________。发酵完成后，将发酵液用_________过滤，除去葡萄皮和籽；酿果酒时，加蔗糖是为了_________。

（3）在制作泡菜测定亚硝酸盐含量时，显色剂是由10g/L的对氨基苯磺酸和1g/L的N-1-萘基乙二胺_________混合而成，泡菜打成匀浆前，_________（填不需要/需要）用清水冲洗；泡菜腌制过程中若泡菜坛有砂眼，常导致腌制的蔬菜臭而不酸，其原因可能是_________条件下乳酸菌不发酵，而其它杂菌繁殖后导致蔬菜腐败发臭。泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有_________等（写出两点）。

（二）药用植物是一类具有特殊用途的经济植物，对人类健康具有重要的医疗和保健作用。药用植物的品种改良工作引起了科研人员的重视。请回答下列问题：

（1）科研人员通过对植物_________的培养进行单倍体克隆。为鉴定单倍体植株，可通过制作临时装片观察_________来确定。

（2）人参皂甙具有抗肿瘤等作用，科研人员设计如图1所示流程制备人参皂甙Rg3，并研究过程③生物反应器中人参细胞产量、人参皂甙Rg3产量随培养时间的变化，结果如图2。

图1中的过程②常将愈伤组织进行悬浮培养得到X，X是_________，实现了能产生人参皂甙Rg3的细胞克隆及其工业化生产。由图2可知，影响人参皂甙Rg3产量的因素是_________。

（3）东莨菪碱是从东莨菪中分离出来的可用于麻醉镇痛、止咳、平喘。将莨菪中提取到天仙子胺6β羧化酶基因转入颠茄中，转基因颠茄能够产生大量的东莨菪碱。构建该目的基因的基因文库需要用到的工具酶是_____，然后用_________从该基因文库中选择、钓取。含目的基因的农杆菌侵染植物细胞时，加入农杆菌培养液中的植物组织往往切成许多小块，这种创伤刺激的意义是_________（写出两点）。

Answer

排走冷空气 发酵过程中葡萄皮的色素进入到发酵液中 两层纱布 增加酒精含量与糖含量 等体积 不需要 有氧 温度、食盐用量和腌制时间等 花药（或花粉） 有丝分裂中期的染色体数目 细胞系（或细胞株） 培养时间、人参细胞产量（或细胞数量、密度） 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 基因探针（或核酸探针、单抗特异探针） 释放信号分子、吸引农杆菌；促进脱分化有利于形成愈伤组织

【解析】

（1）在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌；葡萄酒呈现深红色的原因：在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液，在缺氧，呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。（2）测定亚硝酸盐含量的方法是：比色法，原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。腌制的条件：在腌制过程中要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。温度过高、食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。

（一）（1）高压蒸汽灭菌锅灭菌，开始加热时要打开排气阀、关闭安全阀，其目的是为了使水沸腾，排出锅内的冷空气，以避免锅内达不到预设的温度或压力。

（2）在发酵过程中，随着酒精度数的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色；发酵完成后，将发酵液用两层纱布过滤，除去葡萄皮和籽；酿果酒时，加蔗糖是为了增加酒精含量和糖含量。

（3）显色剂是由10g/L的对氨基苯磺酸和1g/L的N-1-萘基乙二胺盐酸盐等体积混合而成，泡菜打成匀浆前，不需要用清水冲洗，若冲洗会将乳酸菌菌种冲洗掉；乳酸菌是厌氧菌，若泡菜腌制过程中泡菜坛有砂眼，导致氧气含量增加，有氧条件下乳酸菌不发酵，而其他杂菌繁殖后导致蔬菜腐败发臭。泡菜制作过程中要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量。如果温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短，亚硝酸盐含量会增加。

（二）（1）科研人员通过对植物花粉的培养进行单倍体克隆；染色体在光学显微镜下清晰可见，所以为鉴定单倍体植株，可通过制作临时装片观察有丝分裂中期的染色体数目来确定。

（2）图1中的过程②常将愈伤组织进行悬浮培养得到X，X是细胞株，实现了能产生人参皂甙Rg3的细胞克隆及其工业化生产。由图2可知，随着培养时间的延长，人参细胞的数量先增加后稳定；人参皂甙Rg3产量先增加后稳定，故影响人参皂甙产量的因素有人参细胞的数量和培养时间。

（3）构建该目的基因的基因文库需要用到的工具酶是限制酶和DNA连接酶，然后用基因探针从该基因文库中选择、钓取。含目的基因的农杆菌侵染植物细胞时，加入农杆菌培养液中的植物组织往往切成许多小块，这种创伤刺激可以释放信号分子、吸引农杆菌；促进脱分化有利于形成愈伤组织。