Question

葡萄除了含有丰富的葡萄糖、果糖、麦芽糖外，还含有果胶、酒石酸、多种维生素和21种花青素。但葡萄不耐储藏，因此除了鲜食，许多家庭都有自制葡萄酒的习惯。请回答下列相关问题：

(1)某同学想用实验探究A、B两个品种的葡萄上野生酵母菌含量的多少，当他将等浓度等量的两种葡萄汁接种于平板上并培养一段时间后，该同学观察到了多种不同的菌落，区别不同菌落的特征有_________(至少答出2点)。该同学在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多，原因是不易通过培养得到_________________。该同学需要每隔一段时间统计一次酵母菌菌落数目，选取_______________时的记录作为记录结果。

(2)酿酒葡萄通常皮厚粒小糖分高，而市售鲜食葡萄经改良后皮薄粒大但含糖量低。于是，有人就在酿制葡萄酒前向发酵瓶中添加了大量的白糖，其余操作均正常，结果酿出的葡萄酒中几乎检测不到酒精，其失败最可能的原因是 _________。

(3)工业生产上为了使优良酵母细胞多次利用，可用固定化酵母细胞进行葡萄酒发酵。选择固定化酵母细胞而不是固定化相关酶进行酒精发酵的主要原因是______。固定细胞时常用______________作为载体，在固定前，需要对酵母细胞培养，使其数量迅速增加，为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释一定倍数后，经等体积台盼蓝染液染色，用血细胞计数板计数________色细胞的个数。

(4)人们制作馒头时，为使馒头松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，是因为酵母菌在发酵过程中产生了大量的_________________。

Answer

形状、大小、颜色和隆起程度 单菌落 菌落数稳定 蔗糖浓度过高，导致酵母细胞失水过多死亡 酒精发酵过程需要多种酶参与，固定细胞固定的是一系列酶，可达到连续生产的目的 海藻酸钠 无色 CO2（气体）

【解析】

1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌。
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（1）在一定培养条件下同种微生物表现出稳定的菌落特征，这些特征包括菌落形状、大小、隆起程度、颜色等方面。滴加到培养基表面的菌悬液量过多，两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落，计数引起很大误差，所以最好形成单个菌落。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

（2）在酿制葡萄酒前向发酵瓶中添加了大量的白糖，导致蔗糖浓度过高，其中的酵母菌失水死亡，因而酿出的葡萄酒中几乎检测不到酒精。

（3）葡萄酒发酵过程中需要多种酶参与，固定化细胞固定的是一系列酶，可以达到连续生产的目的，所以选择固定化酵母细胞而不是固定化某一种酶进行酒精发酵。固定细胞时常用海藻酸钠作为载体。经台盼蓝染液染色后，死细胞会被染成蓝色而活细胞不着色，所以监测酵母的活细胞密度，用血细胞计数板计数无（不着）色细胞的个数。

（4）酵母菌在发酵过程中产生了大量的CO2（气体）使馒头松软。