Question

某研究小组以陈醋发酵菌种为研究对象，分离筛选出具有耐乙酸特性的乳酸菌。请根据所学知识回答下列问题。

（1）实验前需要对实验用具进行灭菌，培养皿、锥形瓶等玻璃仪器一般采用的灭菌方法是___________。

（2）取发酵菌种加入无菌缓冲液至不同稀释度，分别涂布于乙酸浓度为4%的固体培养基进行首轮筛选，该过程的接种方法称为____________，固体培养基常用的凝固剂是____________。

（3）首轮筛选获得6种菌株后，将各菌株分别接种于含4%乙酸的液体培养基中继续培养8天，培养基应设置________（富氧/厌氧）条件。培养结束后比较各菌株产乳酸性能，结果如图1所示。

根据实验结果，请

①6株菌中产乳酸性能最好的是_____________。

②JN500905和JN500908不产乳酸，请分析这两种菌首轮被筛选出来的原因_____________。

（4）将筛选出的菌株进行培养，其生长曲线如图2所示。该菌株在7天后数量不再增加，请从培养条件的角度写出可能的原因：________________________________（写出两种原因）。

Answer

干热灭菌 稀释涂布平板法 琼脂 厌氧 JN500903 这两种菌不产乳酸但耐乙酸，因此能够在含乙酸的培养基中存活并大量繁殖形成菌落 营养物质被消耗、有害代谢产物积累、理化条件改变等

【解析】

通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。微生物接种的常用方法为平板划线法和稀释涂布平板法。

（1）能耐高温的、需要保持干燥的物品，如培养皿、锥形瓶等玻璃仪器一般采用干热灭菌的方法灭菌。

（2）将不同稀释度的发酵液用涂布器涂布在固体培养基上的接种方法属于稀释涂布平板法。固体培养基常用的凝固剂是琼脂。

（3）乳酸菌为厌氧菌，故接种菌体的培养基应在厌氧环境下培养。

①由图1柱形图高度可知，6株菌中产乳酸性能最好的是JN500903。

②首轮筛选的培养基含有4%的乙酸，凡是耐乙酸的菌体均可在上述培养基上生长，之所以首轮筛选时JN500905和JN500908能存活，是因为二者虽不产乳酸，但耐乙酸，因此能够在含乙酸的培养基中存活并大量繁殖形成菌落。

③微生物在培养过程中随着营养物质被消耗、有害代谢产物积累、理化条件改变等不利于菌体繁殖的条件出现，会使菌体的繁殖被抑制，所以该菌株在7天后数量不再增加。