Question

大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌，用于指示食品、饮用水等是否直接或间接受到了粪便的污染。少数微生物能分解乳糖，有些只产酸（酸性物质），有些只产气（气体），而大肠杆菌既能产酸又能产气，且产生的酸性物质能与伊红美蓝反应而呈现黑色。某小组为检测某水体中大肠杆菌的污染状况，选用了如下两种培养基。

培养基名称	配方（L^-1）	pH
乳糖蛋白胨培养基	蛋白胨10g，乳糖5g，牛肉膏3g，NaCl 5g，溴甲酚紫0.016g	7.4
伊红美蓝培养基	蛋白胨10g，乳糖10g，KH2PO4 5g，伊红0.4g，美蓝0.065g，琼脂15g	7.4

回答下列问题：

（1）从物理性质上看，两种培养基的类型__________（填“相同”或“不同”）。在乳糖蛋白胨培养基中，为微生物的生长提供氮源的物质有__________；NaCl除了提供无机盐外，还具有_________作用。

（2）乳糖蛋白胨培养基进行灭菌时，不选用121℃高压灭菌15 min的方法，而是选用115℃灭菌20 min，推测可能的原因是___________。

（3）某小组取两支含乳糖蛋白胨培养基的试管A和B，A管中加入1mL待测水样，B管不作处理，然后都放入培养箱中培养24h。已知溴甲酚紫在酸性时呈黄色，碱性时（pH高于6.8）呈紫色。若出现_________时，则提示水样可能被大肠杆菌污染。

（4）该小组为计数大肠杆菌的数目，同时还各取0.1 mL水样直接涂布到三个伊红美蓝平板培养基上进行培养，分别统计平板上的菌落数为34、36、38，估算出每毫升水样中含360个大肠杆菌。有同学指出，估算的大肠杆菌数目不可信，其原因有___________、__________。

Answer

不同 蛋白胨、牛肉膏 维持细胞渗透压 培养基中有不耐高温（121℃）的物质 A管呈黄色并产气，B管呈紫色不产气 应统计平板上呈现黑色的菌落 缺少不接种的空白对照

【解析】

1.培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。配好后不宜久置，最好现配现用。

2.稀释涂布平板法：稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。

（1）从物理性质上看，两种培养基的类型不同，乳糖蛋白胨培养基是液体培养基，伊红美蓝培养基是固体培养基。在乳糖蛋白胨培养基中，蛋白胨、牛肉膏含有丰富的蛋白质，为微生物的生长提供氮源；NaCl除了提供无机盐外，Na+还具有维持细胞渗透压作用。

（2）乳糖蛋白胨培养基进行灭菌时，不选用121℃高压灭菌15 min的方法，而是选用115℃灭菌20 min，推测可能的原因是培养基中有不耐高温（121℃）的物质，如乳糖蛋白胨培养基的成分中含有乳糖，121℃灭菌会使乳糖会降解，碳化。

（3）某小组取两支含乳糖蛋白胨培养基的试管A和B，A管中加入1mL待测水样，B管不作处理，然后都放入培养箱中培养24h。已知溴甲酚紫在酸性时呈黄色，碱性时（pH高于6.8）呈紫色，大肠杆菌既能产酸又能产气，若出现A管呈黄色并产气，B管呈紫色不产气，则提示水样可能被大肠杆菌污染。

（4）该小组为计数大肠杆菌的数目，同时还各取0.1 mL水样直接涂布到三个伊红美蓝平板培养基上进行培养，分别统计平板上的菌落数为34、36、38，估算出每毫升水样中含360个大肠杆菌。有同学指出，估算的大肠杆菌数目不可信，其原因有：大肠杆菌产生的酸性物质能与伊红美蓝反应而呈现黑色，故应统计平板上呈现黑色的菌落，缺少不接种的空白对照，未排除其他因素的干扰。