Question

回答下列（一）（二）小题：

（一）为了寻找修复多环芳烃污染后土壤的真菌品种，有关研究如下：已知某些真菌品种分泌的漆酶可以氧化多种多环芳烃有机污染物，而且可以氧化愈创木酚产生红棕色物质。从土壤中筛选分泌漆酶的真菌菌株流程如图1，选择F-5进行多环芳烃严重污染土壤修复研究，共设四个处理，每个处理三个重复，多环芳烃的降解情况如图2所示。分析并回答下列问题：

图1 筛选分泌漆酶的高表达真菌菌株

注：AS：将5mLF-5菌株培养物匀浆与5g玉米粉混匀，加入土壤中

A：将5mLF-5菌株培养物匀浆加入土壤中

S：将5g玉米粉加入土壤中

CK：土壤中不加营养物质和微生物匀浆

图2多环芳烃降解情祝的柱形图

（1）图1将土壤悬浮液进行梯度稀释时应用__________水，①②培养基按物理性质分属于__________，对接种环灭菌的方法是___________。涂布到培养基上的菌悬液不宜过多的原因是___________。

（2）①中挑取的单菌落应有何特征____________________，为什么又要将菌株接种于不含愈创木酚的②培养基上培养______________________________。

（3）分析图2可知：AS和A两种处理的降解率明显高于CK和S两组，而AS和A之间差异不显著，这表明土壤多环芳烃降解的主要原因是_____________________。此外推测S组的降解率显著高于CK的原因是供试土壤为长期污染的土壤，其中可能含有______________________，通过添加营养物质可以在一定程度上刺激并强化其功能。

（二）某中国科研团队通过体细胞核移植成功克隆猕猴“中中”和“华华”，打破了体细胞克隆非人灵长类动物的理想是不可能实现的观点。实验流程如图所示，分析并回答下列问题：

（1）供体体细胞在体外培养时，定期更换培养液的目是____________。由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全弄清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入______________。

（2）体细胞核移植时，将甲的细胞核移植到乙的去核卵母细胞中，选择卵母细胞的原因是_____________；图中④表示______________技术。

（3）克隆猴“中中”和“华华”核基因组理论上与_____________（填“甲”“乙”或“丙”）猴一致，科研人员通过27个微卫星位点分析证明克隆猴核基因组信息与理论上一致，微卫星序列是1-4个碱基的重复序列，不同个体间重复次数往往不同，说明微卫星位点_____________（填“容易”或“不容易”）发生变异，选用多个微卫星位点而非个别微卫星位点的优点是______________；“中中”和“华华”的有些性状与核基因组供体并不完全相同，除环境因素外，发生此现象的原因是___________________________。

Answer

无菌水 固体培养基 灼烧灭菌 防止菌体堆积得不到由单个真菌形成的菌落 菌落周围有红棕色氧化圈 确认颜色变化是否为菌落本身的颜色而非分泌漆酶所致 接种真菌F-5 具有一定降解功能的土壤微生物 防止代谢产物积累对细胞自身造成危害 动物血清或血浆 卵母细胞的质中含有能使已分化的核表达出全能性的营养和物质 胚胎移植 甲 容易 减小误差，提高实验数据的准确性 卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响

【解析】

微生物筛选培养的过程：

①取样：在微生物富集的环境中取样，如：想培养分解硝基苯酚的细菌，应在硝基苯酚含量较高的环境中进行取样。

②选择培养：利用选择培养基（含有特定氮源或碳源），保证要分离微生物生长但是抑制其他微生物生长。

③分离纯化：可以利用稀释涂布平板法或平板划线法将选择培养后的微生物接种培养，筛选鉴定，确定目标菌落，然后接种特定菌落微生物进行纯化培养。

培养基的成分：一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气等的要求。

动物细胞培养：在动物细胞的培养液中需加入有机盐、无机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸及血清（两盐、两素、两酸、一血清），以保证细胞的正常生命活动。

胚胎移植：一般将胚胎培养到桑葚胚或囊胚时期即可进行移植，在移植之前可以进行胚胎性别鉴定确定胚胎性别，也可以进行胚胎分割，增加胚胎数目，但是注意在分割时需要将胚胎的内细胞团均等分割，保证分割后胚胎发育正常。

（一）（1）将土壤悬浮液进行梯度稀释时应用无菌水，以防止样品被杂菌污染。①②培养基都可长出菌落，所以按物理性质分属于固体培养基。对接种环灭菌的方法是灼烧灭菌。涂布到培养基上的菌悬液过多易造成防止菌体堆积得不到由单个真菌形成的菌落。

（2）①中挑取的单菌落应是能够分泌漆酶的品种，培养基中含有愈创木酚，若菌体可以分泌漆酶，则菌落周围会有红棕色氧化圈出现。有些菌种可直接分泌红棕色物质，所以在不含愈创木酚的培养基上再接种一次，确定培养基颜色变化为菌落本身的颜色还是分泌漆酶所导致的颜色变化。

（3）分析图2可知：AS和A两种处理的降解率明显高于CK和S两组，而AS和A之间差异不显著，AS和A均加入了5mL的F-5菌株培养物，而CK和S两组未加，所以土壤多环芳烃降解的主要原因是接种真菌F-5。供试土壤为长期污染的土壤，其中可能含有具有一定降解功能的土壤微生物，S组较CK组多加入了玉米粉，所以S组的降解率显著高于CK的原因可能为：添加营养物质可以在一定程度上刺激并强化土壤微生物的功能。

（二）（1）动物细胞体外培养需要定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害，由于人们对动物细胞所需营养物质还没有完全弄清楚，因此在培养细胞时需在培养基中加入动物血清或血浆。

（2）由于卵母细胞的质中含有能使已分化的核表达出全能性的营养和物质,所以体细胞核移植时一般将细胞核移植到去核卵母细胞中。图中④表示将克隆胚胎移入代孕个体丙，所以表示胚胎移植技术。

（3）克隆个体的基因型与核供体相同，所以克隆猴“中中”和“华华”核基因组理论上与甲一致。微卫星序列是1-4个碱基的重复序列，不同个体间重复次数往往不同，说明微卫星位点的碱基序列容易重复或缺失，因此微卫星位点容易发生变异，选用多个微卫星位点而非个别微卫星位点可以防止个别位点突变造成检测误差，因此选用多个微卫星位点的目的是减小误差，提高实验数据的准确性。性状由基因与环境相互作用控制，基因包括核基因和质基因，所以“中中”和“华华”的有些性状与核基因组供体并不完全相同，除环境因素外，就是受卵母细胞的细胞质中的遗传物质的影响。