Question

硒是一种化学元素，可用作光敏材料、电解锰行业催化剂动物体必需的营养元素和植物有益的营养元素等。硒在地壳中的含量很低，通常极难形成工业富集。亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，土壤中的一些富硒细菌可将其还原为红色单质硒，除工业上生产硒的方法之外，利用这种方法也可以得到少量的硒及分解亚硒酸钠的细菌。如图为土壤中富硒细菌的筛选和纯化过程。请回答下列问题。

（1）应选择____________的土壤样品接种到含亚硒酸钠的液体培养基中进行培养，若②中出现____________的现象，则说明培养基中的亚硒酸钠被细菌还原。

（2）④采用的接种方法为____________法，使用该方法能得到单一菌落的原理是___________。

（3）固定化富硒菌一般采用____________法，不采用另外两种方法的原因是____________。

（4）研究人员筛选出一种具有较强富硒能力的菌株，现欲通过观察菌落来判断菌株对亚硒酸钠的耐受值，请将下列实验补充完整；

①配制系列浓度梯度的亚硒酸钠____________（填“液体”或“固体”）培养基；

②向培养基中分别接种____________的该菌株菌液，在适宜条件下培养一段时间；

③观察菌落生长情况，____________的培养基对应的最高亚硒酸钠浓度即为该菌株的最高耐受值。

Answer

富含亚硒酸钠 培养基变红（红色） 稀释涂布平板 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 包埋 细菌细胞分子较大，难以吸附和结合，通常采用包埋法 固体 等量 有菌落生长（有菌落生长且数目最少）

【解析】

微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）应选择富含亚硒酸钠的土壤样品接种到含亚硒酸钠的液体培养基中进行培养。由“富硒细菌可将其还原为红色单质硒”可知，若②中出现培养基变红的现象，则说明培养基中的亚硒酸钠被细菌还原。

（2）由图可知，④采用的接种方法为稀释涂布平板法，使用该方法能得到单一菌落的原理是在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

（3）固定化方法包括包埋法、化学结合法、物理吸附法，固定化富硒菌一般采用包埋法，不采用另外两种方法的原因是细菌细胞分子较大，难以吸附和结合，通常采用包埋法。

（4）①通过观察菌落来判断菌株对亚硒酸钠的耐受值，配制系列浓度梯度的亚硒酸钠固体培养基；

②实验设计应注意等量原则，故向培养基中分别接种等量的该菌株菌液，在适宜条件下培养一段时间；

③亚硒酸钠对细菌的生长有明显的毒害作用，由题意可知，有菌落生长且数目最少的培养基对应的最高亚硒酸钠浓度即为该菌株的最高耐受值。