Question

转基因抗虫棉是将从苏云金芽孢杆菌中分离出来的Bt毒蛋白基因转入植物细胞培育获得，回答下列相关问题。

（1）从苏云金芽孢杄菌获得Bt毒蛋白基因后，可通过PCR技术进行扩增，该过程需要有________作为引物，该技术中所用的酶是________。

（2）将Bt毒蛋白基因导入植物细胞常用________法，该方法中需将Bt基因插入到Ti质粒的________上，其原因是________________________。

（3）检测Bt毒蛋白基因是否导入植物细胞，可以用________________________________作为探针进行检测，导入成功的标志是________________________________。将含有Bt毒蛋白基因的植物细胞培育成抗虫植株需通过________技术。

Answer

一段已知Bt毒蛋白基因的核苷酸序列 Taq酶（或热稳定DNA聚合酶） 农杆菌转化 T-DNA T-DNA可携带目的基因进入受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上 放射性同位素标记的Bt毒蛋白基因的一条链 显示出杂交带 植物组织培养

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取方法有：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）PCR技术中所用的酶为耐高温的热稳定DNA聚合酶，即Taq酶，PCR技术扩增目的基因首先要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。

（2）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，该方法中，需将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，利用T-DNA的转移作用，将目的基因携带进入受体细胞，并将目的基因整合到受体细胞染色体的DNA上。

（3）检测目的基因是否导入受体细胞，用DNA分子杂交技术，该方法需用放射性同位素标记的Bt毒蛋白基因的一条链作为探针，若显示杂交带，则说明受体细胞中含有目的基因，导入成功。将含有目的基因的植物细胞培育成转基因植株需通过植物组织培养技术。