Question

Ⅰ、某地因疫情变化管控升级，对境外或国内疫情重点地区来的人员，一律实行“14天集中隔离医学观察+14天居家隔离医学观察+2次核酸检测+1次血清抗体检测”的管控措施，做到凡进必检、不漏一人、万无一失。

Ⅱ、中国率先开启新冠疫苗二期临床研究，据研究新冠病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在康复病人的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。下图为某机构研制疫苗的部分过程。

请回答下列相关问题：

（1）对疫情重点地区输入人员进行核酸检测需要用到_____________________标记的目的基因做探针，进行血清抗体检测的方法是______________。

（2）选择性扩增S基因需要的前提条件及原因是___________________________。

（3）图示过程用到的酶有______________，表达载体导入到动物细胞常用的方法是______________________。

（4）S基因在培养的动物细胞中稳定遗传的关键是______________。

（5）为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用动物细胞中表达的S蛋白与_____________进行杂交实验，从而得出结论。

Answer

用含放射性同位素（或荧光素） 抗原—抗体杂交 找到S基因核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物 逆转录酶、Taq酶、限制酶和DNA连接酶 显微注射法 S基因需要整合到细胞核中的DNA分子中 康复病人血清

【解析】

本题主要考察了基因工程的具体步骤，对目的基因进行检测一般有三个层次的检测，检测目的基因是否插入受体细胞需要使用DNA分子杂交，检测目的基因是否转录需要使用分子杂交法，这两种方法都是应用了碱基互补配对原则，而检测目的基因是否翻译，则使用抗原—抗体杂交法，应用的原理是抗原和抗体特异性结合。

（1）对人体进行核酸检测的时候，基因探针技术依据碱基互补配对原则，一般探针要用放射性同位素（或荧光素）标记，这样可以显示杂交带；血清抗体检测依据抗原与抗体的特异性结合，方法为抗原—抗体杂交；
（2）选择性扩增S基因一般使用的技术为PCR技术，该技术扩增的前提条件为已知S基因核苷酸序列，根据这一序列可以合成引物；
（3）观察题干可以发现，该技术涉及到RNA的逆转录过程、PCR技术、基因表达载体的构建等等，需要的酶有逆转录酶、Taq酶、限制酶和DNA连接酶；将重组质粒导入到动物细胞的常用方法为显微注射法；
（4）S基因要在动物细胞中稳定遗传，需要S基因整合到细胞核中的DNA分子中；
（5）一般检测S蛋白的产生需要使用抗原—抗体杂交实验，可用S蛋白与曾经感染但已经康复的病人血清进行杂交实验，该个体的血清中有抗病毒S蛋白的抗体，从而验证结论即可。