Question

2，4-D是一类广泛应用于单子叶作物田间的除草剂，其大量施用导致土壤污染。某研究小组欲从2，4-D污染土壤样品中筛选2，4-D降解菌株，采集土样后进行如图操作：

富集培养1组培养液成分：基础无机盐培养液+葡萄糖+2，4-D

富集培养2组培养液成分：基础无机盐培养液+2，4-D

基础无机盐培养液成分：MgSO₄、（NH₄）₂SO₄、FeS₄、KH₂PO₄，Na₂HPO₄

回答下列问题。

（1）微生物实验要严格防止杂菌污染，划线纯化时对接种环可采用________灭菌。

（2）在特定环境中只让一种来自同一祖先的微生物群体生存的技术叫作纯化。纯化接种的方法有________和平板划线法。纯化培养时，需在基础无机盐培养液中添加以2，4-D为唯一碳源，还要添加_______。

（3）富集培养目的是_____，富集培养________（填“1”或“2”）组菌落数多，判断依据是______。

（4）欲检测所获得的不同菌株对2，4-D降解能力大小，可将目的菌分别接种在相同浓度的2，4-D培养液中，培养一段时间后，检测_____，评估其降解能力。

Answer

灼烧 稀释涂布平板法 琼脂 增加目的菌（2，4-D降解菌）的浓度 1 2组只有能利用2，4-D作碳源的微生物可以繁殖，而1组能利用葡萄糖和2，4-D作碳源的微生物均可繁殖 2，4-D剩余量（或2，4-D降解率、2，4-D的降解产物）

【解析】

从微生物的混合物中筛选目的微生物需要使用选择培养基，选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养需求或其对某种化学、物理因素的抗性不同而制备的培养基，能提供有利于目的菌株生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物生长。本实验欲从2，4-D污染土壤样品中筛选2，4-D降解菌株，因此需要利用以2，4-D为唯一碳源的选择培养基。实验室常用的灭菌方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。

（1）微生物实验要严格防止杂菌污染，划线纯化时每一次划线前都要对接种环采用灼烧灭菌。

（2）微生物接种的方法很多，常用的纯化接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。纯化培养时一般使用固体选择培养基，除在基础无机盐培养液中添加以2，4-D为唯一碳源外，还要添加凝固剂琼脂。

（3）富集培养目的是增加目的菌（2，4-D降解菌）的浓度，以确保能从样品中分离所需微生物。比较两组培养基成分可知，差异在于富集培养1组中含有葡萄糖而2组没有，因此1组中能利用葡萄糖和2，4-D作碳源的微生物均可繁殖，而2组只有能利用2，4-D作碳源的微生物可以繁殖，则富集培养1组菌落数较多。

（4）欲检测所获得的不同菌株对2，4-D的降解能力大小，可将目的菌分别接种在相同浓度的2，4-D培养液中，培养一段时间后，检测培养液中的2，4-D的剩余量，剩余量最低的菌株降解能力最强。