Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）我国南方多地有利用糯米制作红曲酒的传统。其基本过程是大米经蒸煮、红曲霉菌糖化后，用酿酒酵母进行酒精发酵得到新鲜红曲酒。回答下列问题

（1）蒸煮大米的目的除了使淀粉糊化和挥发掉杂味外，还具有_________作用。落缸之前通常需要用________对菌种进行活化，并需对蒸煮过的米饭进行________处理。

（2）红曲霉富含淀粉酶和蛋白酶，其分泌的淀粉酶和蛋白酶水解大米中的淀粉和蛋白质分别为酿酒酵母提供________。

（3）红曲酒的产量受发酵条件的影响，同时还与________（答2点即可）有关。

（4）若要长期保存红曲酒，需要将红曲酒加热煮沸，其目的是________，因此煮沸后应该________装坛保存，原因是________。

（二）回答下列与培育转基因大豆有关的问题

（1）若要获得未知序列的抗虫基因，可从________中获取。形成重组DNA时，若目的基因反向插入会引起目的基因反向表达和________。为了避免目的基因的反向插入，可选择使用________的两种限制性核酸内切酶。

（2）利用农杆菌将目的基因导入大豆细胞所选用的农杆菌菌液浓度不能过大的原因是________。若选择显微注射法导入目的基因，需要将目的基因注射到大豆细胞的________。利用显微注射导入的目的基因整合到受体细胞的基因组中，具有________（答出2点即可）等特征。

（3）大豆外植体经培养基中适当配比的________的诱导，发生脱分化形成愈伤组织，再分化可形成再生植株。若愈伤组织中缺乏________，将无法再生形成植株。

Answer

消毒（去除杂菌） 含蔗糖的温水 冷却 碳源和氮源 酵母菌数量、原料的量 杀灭杂菌，避免保存过程中变质发酸 趁热 冷却后又会被杂菌污染 基因文库 模板链和编码链互换 切割后形成不同粘性末端 浓度过大会造成过度感染，引起外植体的死亡 细胞核 随机性和不稳定性 营养物质和植物生长调节剂 成胚性的细胞系

【解析】

酿酒的时候主要依靠酵母菌的发酵，在发酵时需要尽量保证无菌环境，可以在发酵前对其进行高温加热处理。微生物在培养时主要需要碳源、氮源、无机盐和水等，而酵母菌属于异养型生物，需要提供糖类、蛋白质等有机营养。获取目的基因的方法主要有从基因文库中获取、用PCR技术来扩增、化学合成法等，对未知序列的目的基因进行获取主要是从基因文库中获取。

（一）（1）蒸煮大米需要使用高温加热，还可以杀死杂菌来消毒；要活化菌种，一般选择含蔗糖的温水来处理；蒸煮过的米饭在发酵前需要先冷却，才能进行发酵，否则过高的温度会杀死菌种；

（2）淀粉属于糖类，主要来提供碳源，蛋白质中含有N元素，主要来提供氮源；

（3）发酵产物除了与发酵条件有关以外，还与发酵液中酵母菌数量、原料的量等因素有关；

（4）红酒若要长期保存，则需要杀灭杂菌，避免保存过程中变质发酸；所以在封装的时候应该在冷却前，也就是趁热进行封装，否则冷却后又会给杂菌增加污染的机会；

（二）（1）在获取目的基因时，对未知序列的抗虫基因获取一般从基因文库中进行获取；由于DNA两条链反向平行，且基因中只有一条链在转录时作为模板链存在，因此构建基因表达载体时若目的基因反插会使得在转录时反向转录，其模板链和非模板链也会互换；目的基因能反向插入主要与两侧的黏性末端相同有关，若使用切割后形成不同粘性末端的两种限制酶，则可以解决这个问题；

（2）将目的基因导入植物细胞时常常使用农杆菌转化法，利用的原理是农杆菌可以侵染植物细胞将自身的部分DNA转入植物细胞中，但农杆菌菌液浓度不能过大，否则会造成过度感染，引起外植体的死亡的现象；显微注射法导入目的基因时需要将目的基因导入到受体细胞的细胞核中；这种方法由于是通过显微注射仪进行的显微注射，所以具有随机性和不稳定性等特点；

（3）外植体进行诱导脱分化时，需要在培养基中适宜比例的营养物质和植物生长调节剂；若愈伤组织中缺乏成胚性的细胞系，则无法再分化产生植株。