Question

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ表示三种限制酶。请据图回答：

（1）从高表达人乳铁蛋白的组织细胞中提取mRNA，通过______过程获得cDNA，用于PCR扩增。

（2）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用______限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌，首先需要在含______的培养基上进行。

（3）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_____（填字母代号）。

A．启动子           B．tet^R            C．复制原点           D．amp^R

（4）进行过程②之前，需用相应的激素处理代孕牛，使其处于______状态。

（5）对早期胚胎进行切割，可获得多个新个体，该种生殖方式属于_____生殖。

（6）为检测人乳铁蛋白基因是否转录，可采用______技术。

Answer

逆转录 BamHⅠ和HindⅢ 氨苄青霉素 A 同期发情 无性生殖（克隆） （DNA—RNA）分子杂交

【解析】

分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程①是将重组质粒导入受体细胞；过程②需采用胚胎移植技术。

（1）以mRNA为模板合成DNA的过程称为逆转录。
（2）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、Hindlll、Smal的切割位点，其中限制酶Smal的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHI。用限制酶HindⅢ和BamHI切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行。
（3）启动子是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列，A正确。故选A。
（4）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；进行胚胎移植前，需要用相应的激素处理代孕牛，使其处于同期发情状态。
（5）来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。
（6）检测目的基因是否转录常用分子杂交技术。