Question

科硏团队利用基因编辑技术获得一只理想的动脉粥样硬化基因编辑狗模型—“苹果”。为增加相同遗传背景的模型研究数量，研究团队利用“苹果”的耳部皮肤细胞进行了体细胞克隆，成功获得“龙龙”等3只基因编辑狗体细胞克隆犬。请回答下列问题：

（1）采集“苹果”的耳部皮肤组织块后，用________________处理获得分散的成纤维细胞，通常将其置于含95%空气和5%CO₂的混合气体培养箱中培养。放置在混合气体环境培养的目的是__________________________________。

（2）采集和选取处在____________（填时期）的卵母细胞用于核移植。用于核移植的供体体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，主要原因是_______________________________。

（3）为获得更多的具有相同遗传背景的动脉粥样硬化基因编辑狗，在利用体细胞克隆技术的同时，常采用的方法是对早期胚胎进行_______________。

（4）“龙龙”与“苹果”的性状不完全相同，从遗传物质的角度分析其原因是_______________。

Answer

胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 既满足细胞呼吸对O2的需要，也便于维持培养液的pH 减数第二次分裂中期 传代10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型、较容易恢复全能性 胚胎分割 卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响

【解析】

1、动物细胞培养条件：

（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清楚代谢废物；（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质；（3）适宜的温度和PH；（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。

2、胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。

3、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等分、4等分或8等分等，经移植获得同卵双胚或多胚的技术。因为来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，因此胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。

4、核移植的受体细胞选用去核卵（母）细胞的原因：卵（母）细胞大，容易操作；卵（母）细胞质多，营养丰富；含有促使细胞全能性表达的物质。

（1）获取供体细胞时，要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理组织块，制成细胞悬液；通常将其置于含95%空气和5%CO2的混合气体培养箱中培养，目的是既满足细胞呼吸对O2的需要，也便于维持培养液的pH。

（2）常选取处于减数第二次分裂中期的卵母细胞用于核移植；传代培养的细胞传至10代后增殖会逐渐缓慢甚至停止，部分细胞的核型可能会发生改变，恢复全能性也较难。

（3）胚胎分割可获得同卵双胎或多胎，从而提高胚胎利用率，获得更多的具有相同遗传背景的个体。

（4）克隆动物与供体动物性状不完全相同，从遗传物质的角度来说，是因为卵母细胞的细胞质中的遗传物质会对克隆动物的性状产生影响。