Question

某班级同学分组进行“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验，A同学从对应10⁶倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，其他小组同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。A同学没有设计对照实验，但由于A同学所在小组的其他成员请假未到，因此保留了未接种的许多空白平板。各组同学都保留了部分土壤样品。

分析认为，A同学的实验结果与其他组同学不同的原因存在两种合理解释，假设一：A同学制作的培养基被污染；假设二：A同学的培养基中的氮源除了尿素之外，还混入了其他含氮物质。回答下列问题。

（1）可运用稀释涂布平板法对每克样品中的菌株数进行计数，计算公式为：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M。其中，C代表______________________，V代表涂布平板时所用的_____________________，M代表___________________。

（2）A同学查看了培养箱中未接种的空白平板，发现_________________________，说明假设一不合理。

（3）若要设计实验探究假设二是否正确，请简要写出实验思路、预期结果和结论。________________。

（4）除了上述假设外，还存在其它合理的解释。例如，A同学所选用的__________与其他同学不同；再如，A同学的接种操作不规范，导致空气中的____________________混入。

Answer

某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 稀释液的体积（ml） 稀释倍数 培养基上无菌落生长 思路：用其它小组的土样和A同学小组的空白平板做重复实验结果和结论：若在同样的稀释度下筛选出大约50个菌落，说明假设二错误；若在同样的稀释度下筛选出大约150个菌落，说明假设二正确 土壤样品 尿素分解菌

【解析】

1、微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、生物实验应遵循对照原则、等量原则、单一变量原则和控制无关变量原则。A同学的实验结果可能是培养基污染造成的，或者A同学的培养基中的氮源除了尿素之外，还混入了其他含氮物质；除外还可能是A同学实验操作过程中污染造成的，也可能是与其他同学所取土壤样品不同造成的，关键是设法排除影响结果的因素。

（1）将收集到的酵母菌放入培养液中扩大培养后，用稀释涂布平板法计算每克样品中的菌株数公式为（C÷V）×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数。

（2）根据题意，造成上述结果的原因中，假设一为A同学制作的培养基被污染，可以采取空白对照的方法进行实验，即将未接种的空白平板在培养箱中培养，观察是否出现菌落生长，若培养基上无菌落出现，则排除培养基污染的可能。

（3）根据题意，造成上述结果的原因中，假设二：A同学的培养基中的氮源除了尿素之外，还混入了其他含氮物质，若要探究假设二是否正确，则实验思路：用其它小组的土样和A同学小组的空白平板做重复实验结果和结论：若在同样的稀释度下筛选出大约50个菌落，说明假设二错误；若在同样的稀释度下筛选出大约150个菌落，说明假设二正确。

（4）根据以上分析可知，生物实验应遵循对照原则、等量原则、单一变量原则和控制无关变量原则。除了上述假设外，还存在其它合理的解释。例如，A同学所选用的土壤样品其他同学不同；再如，A同学的接种操作不规范，操作过程中污染所致，导致空气中的尿素分解菌混入造成实验结果不准确。