Question

某种广泛被使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明，培养皿中会残留少量无菌空气）

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行__________处理。

（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、营养成分的角度要求上述培养基具备特点是____________________________。若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装_____（填“前”或“后”）进行。对培养基进行灭菌，常采用的方法是__________。

（3）图中形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源可能是__________，有透明带菌落利用的氮源主要是该除草剂，据此可筛选出目的菌。

（4）若对活菌进行计数，常用的接种方法为__________。为了计数微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为10⁶的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为__________。

Answer

稀释 以除草剂为唯一氮源的固体培养基 前 高压蒸汽灭菌 N2 稀释涂布平板法 1.6×109个

【解析】

分析题图：该实验是从土壤中筛选分离能降解除草剂的微生物的过程。这样的实验要将土壤稀释处理，以除草剂为唯一的氮源进行处理筛选土壤微生物，以菌落计数法进行统计计数。

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。

（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、营养成分的角度要求上述培养基的特点是：固体培养基且以除草剂作唯一氮源；若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装前进行；对培养基进行灭菌常采用高压蒸汽灭菌法。

（3）根据题中信息“该除草剂的培养基不透明”，则可知无透明带菌落利用的氮源并不是除草剂，而是来自空气中的氮气，有透明带菌落利用的氮源为除草剂。

（4）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法还可用于对微生物进行计数。在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为（155+160+176+149）÷4÷0.1×106=1.6×109个。