Question

尿素中所含的氮素需经分解尿素的细菌分解转化为铵态氮后，才能被植物吸收。尿素小球菌是土壤中常见的高效分解尿素的细菌之一。研究人员欲从土壤中分离出尿素小球菌，进行了一系列操作。回答下列相关问题。

（1）寻找目的菌株掌握的原则是____________________________________。

（2）配制分离尿素小球菌的培养基时，培养基中添加适量的KH₂PO₄与Na₂HPO₄，其作用有_____________、______________。培养基中的琼脂属于多糖类物质，但是它并不能为尿素小球菌提供碳源，原因是______________。

（3）对采集的土壤样品进行稀释后，一般选用稀释倍数为______________的三种稀释液进行平板培养，从中选出菌落数在______________间的平板计数。

（4）对分离得到的尿素小球菌作进一步鉴定时，可在上述培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红的原因是____________________________，再结合菌落的特征等进行确定。

Answer

根据它对生存环境的要求到相应的环境中去寻找 为细菌提供无机盐 保持培养基pH的相对稳定 尿素小球菌细胞中缺乏分解琼脂的酶 104、105和106 30~300 尿素小球菌合成的脲酶将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强，进而使酚红指示剂变红

【解析】

（1）自然界中目的菌株的筛选：

①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。

（2）实验室中目的菌株的筛选：

①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度．pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。

培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。

（1）寻找目的菌株掌握的原则是根据它对生存环境的要求到相应的环境中去寻找。

（2）配制分离能分解尿素的小球菌培养基时，培养基中添加适量的KH2PO4与Na2HPO4，其作用有：为细菌提供无机盐、保持培养基pH的相对稳定。由于尿素小球菌细胞中缺乏分解琼脂的酶，所以培养基中的琼脂虽属于多糖类物质，但是它并不能为尿素小球菌提供碳源。

（3）在土壤中，细菌的数量比真菌的多，所以为了确保稀释后能形成菌落数在30-300之间的培养皿，细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，并从中选出菌落数在30~300间的平板计数。

（4）对分离得到的尿素小球菌作进一步鉴定时，可在上述培养基中加入酚红指示剂，由于尿素小球菌合成的脲酶能将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强，进而使酚红指示剂变红。