Question

利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似，且需要提供引物，引物是子链合成延伸的基础，下列叙述不正确的是（    ）

A.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列

B.设计引物时需要避免引物间的碱基互补配对而造成引物自连

C.退火温度过高可能会导致PCR中得不到任何扩增产物

D.第四轮循环产物中同时含有两种引物的DNA片段所占的比例为15/16

Answer

D

【解析】

PCR技术：①概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，所利用的原理为DNA分子的复制，因此PCR技术一般用于基因扩增；②原理：DNA复制；③条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；④方式：以指数的方式扩增，即约2n；⑤过程：高温变性、低温复性、中温延伸。

A、PCR是一项在生物体外复制特定的DNA分子片段的技术，需要有模板基因，并已知其两端的部分碱基序列，不需要知道其全部序列就可扩增，A正确；
B、PCR过程中需要两种引物分子，不同引物间通过碱基互补配对而形成（部分）双链的话会造成引物不能同模板DNA结合，也就不能发生进一步的链式反应，这一点需要避免，B正确；
C、若退火温度过高，则引物与模板DNA无法形成部分双链，PCR也就不能发生，C正确；
D、由原来的每条母链为模板合成的两个新DNA分子中，只含有引物1或引物2，而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第四轮循环共产生16个DNA分子，其中2分子DNA只有含有1种引物，因此同时含有1和2引物的DNA分子是14个，占14/16，D错误。
故选D。