Question

苯酚是重要的化工原料，被广泛应用于酚醛树脂、炼油、焦碳、染料等的生产中，并成为这些工业废水中的主要污染物。水溶液中的苯酚可被皮肤吸收而引起中毒，含酚废水可使水中生物大量死亡。微生物作为废水处理中活性污泥的主体，是有毒物质分解转化的主要执行者。回答下列问题：

（1）欲选出高效分解苯酚的菌株，应从__________中取样，接着在__________（填固体或液体）培养基中选择培养，以增大高效分解苯酚菌的浓度。对培养基进行灭菌处理时，应采用__________法。

（2）某同学采用稀释涂布平板法对高效分解苯酚的菌株进行计数，其原理是__________。

（3）在4个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10³的稀释液0．1mL，培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为：45、108、114和120，因此可得出1mL菌液中的活菌数为__________个。使用血细胞计数板计数时，为了区分活菌和死菌可采用台盼蓝染色，对活菌计数时应选择视野中__________的细胞进行计数。

（4）微生物对苯酚的降解是在酶的参与下完成的，该酶经分离纯化，可用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，该方法可使电泳迁移率完全取决于蛋白分子的大小，其原因是__________。

Answer

活性污泥 液体 高压蒸汽灭菌 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌 1．14×106 不着色 SDS能使蛋白质发生完全变性SDS能与蛋白质形成SDS-蛋白质复合物，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别

【解析】

1.微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。

2.微生物常见的接种的方法

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）由题干中的信息微生物作为废水处理中活性污泥中取样，用液体培养基进行选择培养，以增大高效分解苯酚菌的浓度，对培养基进行灭菌处理的方法为高压蒸汽灭菌法。

（2）采用稀释涂布平板法对高效分解苯酚的菌株进行计数的原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。

（3）统计的4个平板中要舍弃菌落数为45的平板，因其与其他3个平板的差异太大可能是由于实验过程中操作不当导致的，其余3个平板的平均数是114，由此推出1mL菌液中的活菌数为1.14×106，为了区分活菌和死菌可采用台盼蓝染色，对活菌计数时应选择视野中不着色的细胞进行计数，因为不着色的菌为活菌。

（4）用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，该方法可使电泳迁移率完全取决于蛋白分子的大小的原因是：SDS能使蛋白质发生完全变性：SDS能与蛋白质形成SDS-蛋白质复合物，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别；只有在这种情况下，才可使电泳迁移率完全取决于蛋白分子质量的大小。