Question

如图是获得药用乳腺生物反应器转基因小鼠的流程图。回答下列问题：

(1)图中在Ⅰ过程前提取mRNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是___。

通过PCR扩增目的基因的过程中，两个引物是___的结合位点，也是子链延伸的起点。

(2)图中Ⅱ过程在构建基因表达载体时，有时需要使用两种限制酶切割目的基因所在的片段，同时也用这两种限制酶切割质粒，这样做的优点是___。

(3)图中Ⅲ过程获得的小鼠Es细胞在饲养层细胞上培养，Es细胞表现为__的特点。Ⅳ过程中要将含外源基因的Es细胞导入囊胚的，然后进行胚胎移植。若要一次获得多只相同性状的后代，胚胎移植前应采用___技术，通常选择发育良好、形态正常的囊胚或进行操作。

(4)若获得的已整合药用蛋白基因的转基因小鼠分泌的乳汁中检测不到药用蛋白，根据中心法则分析，其可能的原因是__。

Answer

防止RNA被RNA酶水解 热稳定DNA聚合酶（Tag酶） 避免目的基因及质粒的自身环化和随意连接 只分裂而不发生分化 内细胞团 胚胎分割 桑椹胚 药用蛋白基因没有转录或翻译

【解析】

胚胎移植的基本程序主要包括：

①对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。

②配种或人工授精。

③对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来（也叫冲卵）。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段。直接向受体移植或放入-196℃的液氮中保存。

④对胚胎进行移植。

⑤移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。

(1)图中在目的基因获取前提取mRNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是防止提取的mRNA被RNA酶分解。通过PCR扩增目的基因的过程中，两个引物是热稳定DNA聚合酶（Tag酶）的结合位点，也是子链延伸的起点。

(2)图中Ⅱ过程在构建基因表达载体时，使用两种限制酶同时切割目的基因和质粒，这样做的优点是避免目的基因及质粒的自身环化和随意连接。

(3)小鼠Es细胞在饲养层细胞上培养，Es细胞表现为只分裂而不发生分化的特点。Ⅳ过程中要将含外源基因的Es细胞导入囊胚的内细胞团，然后进行胚胎移植。胚胎移植前，通常选择发育良好、形态正常的囊胚或桑椹胚阶段的内细胞团均等分割，采用胚胎分割技术，一次获得多只相同性状的后代。

(4) 由于转基因表达产物存在于小鼠的乳汁中，检测其体内是否出现该药用蛋白，在分子水平上的检测方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原—抗体杂交，若有杂交带出现表明药用蛋白基因已经没有转录或翻译，形成蛋白质产品；若检测不到药用蛋白，说明药用蛋白基因没有转录或翻译。