Question

为了研究“某酸奶中乳酸菌耐药情况”而制定的流程图，请分析回答：

（1）本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙，乳酸菌在___________（生理过程）中产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈。从功能角度分析，本研究使用的培养基属于___________。

（2）在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，锅内水加热煮沸后，必须___________，以保证锅内气压上升，达到121℃。灭菌后的培养基应适当冷却后，在___________附近倒平板。

（3）在酸奶制作过程中要严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，通常所指的发酵条件包括______________________（至少写出两项）。一般情况下含抗生素牛奶不宜制作酸奶，原因是___________。

（4）请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”实验操作步骤：
步骤1：分别取___________加入灭菌后冷却至50℃左右的三组无菌培养皿的培养基中，立即混匀，静置凝固成平板。
步骤2：向三组培养基中分别接种______________________。
步骤3：将接种后的三组培养基都置于适宜温度等条件下培养若干天，观察比较培养基中菌落生长情况。

Answer

无氧呼吸 鉴别培养基 将锅内冷空气彻底排除 酒精灯火焰 无菌、密闭（无氧） 抗生素抑制了乳酸菌的生长 等量的青霉素、四环素和无菌水 等量相同的待检测的乳酸菌菌种

【解析】

（1）乳酸菌是厌氧细菌，进行无氧呼吸，将葡萄糖分解成乳酸。由题干可知，乳酸与不溶性的碳酸钙形成了溶钙圈，液体培养基中无法观察到该现象，表明该培养基从用途上说，属于鉴别培养基；从物理性质上说，属于固体培养基。

（2）利用高压蒸汽灭菌法灭菌时，将灭菌物品放入盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，继续加热以保证锅内气压上升。为防止外界环境的污染，倒平板时需在酒精灯火焰附近进行。

（3）根据乳酸菌的代谢特点和发酵产物更多、更纯，所以发酵过程要密闭无氧的环境且无杂菌干扰。由于抗生素本身有抑制细菌生长繁殖的特性，而乳酸菌就是细菌的一种，所以乳酸发酵过程中不能加入抗生素，否则会抑制乳酸菌的生长。

（4）由题干可知，该实验目的为检测乳酸菌对青霉素、四环素的耐药性，因此青霉素和四环素的量是自变量。为了保证实验结果的可信度，需设置对照组，其余无关变量应保证相同且适宜。因此需取等量的青霉素、四环素和无菌水加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却至左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板；再向三组培养基中分别接种等量相同的待检测的乳酸菌菌种，观察乳酸菌形成菌落的多少。