Question

2019年起，全国地级及以上城市全面启动生活垃圾分类工作，习近平总书记强调，实行垃圾分类，关系广大人民群众生活环境，关系节约使用资源，也是社会文明水平的一个重要体现。有机垃圾微生物处理的基本原理是利用微生物降解菌产生多种酶，对分类后的有机垃圾进行快速分解。

（1）有机垃圾中油污降解困难，某实验小组欲从油污污染的土壤中筛选出高效降解脂肪的菌株，需配置_____的选择培养基，将采集的土样混匀后从中称取1g，置于经过_____法灭菌处理的液体培养基中培养一段时间，以增加脂肪分解菌的浓度。

（2）利用稀释涂布法平板法进行接种时，要对菌液进行充分稀释的目的是_____________。接种后进行培养时，需将培养皿呈________状态放置。

（3）筛选出高效降解脂肪的菌株后，若需要长期保存，可采用_________的方法。

（4）为测定脂肪酶降解脂肪的能力，需要先将该酶分离出来，常用__________法，该方法是根据__________来分离蛋白质。

Answer

以脂肪为唯一碳源 高压蒸汽灭菌 使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落 倒置 甘油管藏 凝胶色谱（分配色谱） 相对分子质量的大小

【解析】

菌种保藏：临时保藏的方法。首先，将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3~ 6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。但是，这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，装人1 mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20℃的冷冻箱中保存。

凝胶色谱法也称为分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动的速度较慢，而相对分子质量较大的蛋白质，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动的速度较快，相对分子质量不同的蛋白质分子得以分离。

（1）要筛选出高效降解脂肪的菌株，需要从油污污染的土壤中采集取样，并用以脂肪为唯一碳源的选择培养基进行选择培养，具体做法为，将选取的土样混匀后从中称取1g，置于经过高压蒸汽灭菌法处理的液体培养基中培养一段时间，以增加脂肪分解菌的浓度。

（2）利用稀释涂布法平板法进行接种时，需要对菌液进行充分稀释以便能使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。接种后进行培养时，需将培养皿倒置培养，避免水汽滴入到培养皿的表面影响菌落的生长。

（3）菌种长期保存通常采用甘油管藏法，因此，筛选出的高效降解脂肪菌株采用甘油管藏法长期保存。

（4）脂肪酶的化学本质是蛋白质，蛋白质的分离常用凝胶色谱（分配色谱）法完成，该方法是根据蛋白质相对分子质量的大小实现分离，因为蛋白质的迁移速率与分子量的大小有关。