Question

Ⅰ．为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行了如图A 所示的实验。

（1）同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是_________，出现图B结果可能的失误操作是____________。纯化菌株时，还可釆用平板划线法。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有____________。

（2）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将lmL样品稀释100倍，在3 个平板上分别接入0．lmL稀释液；培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为____________个。

Ⅱ．贵州知名品牌“老干妈”系列产品一直沿用传统工艺精心酿造，其中风味豆豉深受大众喜爱，远销国内外。风味豆豉的主要工艺流程是：黄豆→洗净浸泡→煮熟→加适量盐→发酵→加入配料→装坛密封→成品。请回答下列问题：

（3）制作豆豉前期发酵的目的是让霉菌产生相应的酶，如蛋白质转变为小分子肽和氨基酸，脂肪转变为______________，使豆豉营养更加丰富，有利于健康。发酵过程中需采用人工培养纯净菌种，接种前随机选取若干灭菌后的平板，先培养一段时间目的是_______________________________________。

（4）豆豉制成成品后，需测定其亚硝酸盐含量，原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与_____________发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成_____________色染料。

Answer

稀释涂布平板法 涂布不均匀 接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始 5．7×107 脂肪酸和甘油 检测培养基平板灭菌是否合格（或检测培养基是否被杂菌污染） 对氨基苯磺酸 玫瑰红

【解析】

1、微生物常见的接种的方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、分析图B：图B采用的是稀释涂布平板法，但涂布不均匀。

3、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉，其新陈代谢类型是异养需氧型。腐乳制作的原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。

4、测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。

（1）图B中菌落比较分散，其接种方法是稀释涂布平板法；而菌落分布均匀可能的原因是涂布不均匀；造成划线无菌落可能的操作失误有接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始。

（2）利用稀释涂布平板法计数的公式：个/升。

（3）霉菌可以产生脂肪酶使脂肪变为甘油和脂肪酸；发酵过程中需采用人工培养纯净菌种，接种前随机选取若干灭菌后的平板，先培养一段时间以检测培养基平板灭菌是否合格。

（4）在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。