Question

已知限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

（1）基因工程常用载体除质粒外，还有___________________。若要使目的基因在受体细胞中稳定遗传并表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是__________（答两点）

（2）用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，若只能选择一种限制酶，则应选用__________来切割。为避免目的基因反向插入带来的不正常表达，应选用两种限制酶__________切割质粒，选用两种限制酶___________________切割含目的基因的DNA片段。

（3）利用PCR技术扩增目的基因时，可以从图2的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取__________作为引物。

Answer

动植物病毒，λ噬菌体衍生物 目的基因无复制原点，目的基因无表达所需启动子 HindⅢ
HindⅢ和BamHⅠ HindⅢ和Sau3AⅠ B和C

【解析】

基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）基因工程常用载体有质粒、动植物病毒、λ噬菌体衍生物。若要使目的基因在受体细胞中稳定遗传并表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是目的基因无复制原点，也无表达所需启动子。
（2）根据目的基因两侧的限制酶分布可知，若只能选择一种限制酶来切割目的基因和质粒，则应选用HindⅢ来切割。为避免目的基因反向插入带来的不正常表达，应该选用两种酶切割目的基因和质粒，由于限制酶Sau3AⅠ也能切割限制酶BclⅠ和BamHⅠ的识别序列，因此用该酶切割质粒时会破坏两种标记基因，则应选用两种限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割质粒，选用两种限制酶HindⅢ和Sau3AⅠ切割含目的基因的DNA片段。
（3）由于DNA聚合酶只能从5'到3'延伸子链，因此利用PCR技术扩增目的基因时，可以从中选取B和C作为引物。