Question

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有    和    ．

（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如图所示．为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是          ．

（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即     DNA连接酶和    DNA连接酶．

（4）反转录作用的模板是         ，产物是      ．若要在体外获得大量反转录产物，常采用    技术．

（5）基因工程中除质粒外，   和    也可作为运载体．

（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是                ．

Answer

黏性末端 平末端 切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同 大肠杆菌（E.coli） T4 mRNA(或RNA) cDNA(或DNA) PCR 噬菌体 动植物病毒 未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱

【解析】

本题以图文结合的形式综合考查学生对基因工程的知识的识记和理解能力。解答本题需熟记并理解DNA重组技术的基本工具、基因工程的基本操作程序并形成清晰的知识网络。在此基础上，结合问题情境，从题意中提取有效信息进行相关问题的解答。

(1)限制性核酸内切酶（简称限制酶）切割DNA分子后，产生的片段末端类型有黏性末端和平末端。

(2)目的基因与运载体具有相同的黏性末端才能连接，若用包括EcoRⅠ在内的两种限制酶切割目的基因，则另一种限制酶必须具有的特点是：切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同。

(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即大肠杆菌DNA连接酶和T4 DNA连接酶。

(4)反转录的实质是以mRNA为模板合成DNA的过程，因此反转录作用的产物是cDNA(或DNA)。得到DNA可在体外，采用PCR技术进行大量扩增。

(5)由于未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱，因此若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而通常用Ca2+处理大肠杆菌细胞，使其成为感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒。