Question

某兴趣小组为了探究酵母菌种群数量变化规律，做了如下实验：

实验器材与试剂：菌种、现制的马铃薯培养液或肉汤培养液、试管、血球计数板（2 mm×2 mm方格）、滴管、显微镜等。

实验步骤：

①取相同试管若干支，分别加入10 mL肉汤培养液（或马铃薯培养液），分别标记1、2、3等。

②将酵母菌母液分别加入试管各10 mL，摇匀后用血球计数板计数起始酵母菌个数（N₀），做好记录。

③将各试管放入冰箱中培养7天。

④每天同一时间各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。

实验记录及计算结果如下表：（单位：个）

天数	1	2	3	4	5	6	7
观察值						M6
计算值						N6

实验探讨：

（1）实验步骤中有两处错误，请指出并修改：

①________________；

②_________________。

（2）用血球计数板计数酵母菌个数时，取适量培养液后的操作是______________。

（3）观察值是血球计数板上若干方格内的酵母菌数的平均值，对于压在方格界限上的酵母菌的处理方法是___________。如果计数时，盖玻片下的培养液厚度为0．1 mm，第6天吸取的培养液稀释10倍后，进行计数时观察值为M₆，请推导出10 mL培养液中酵母菌的总数N₆约为______个。

（4）本探究实验需要设置对照吗?____________，理由是___________________。

Answer

缺少灭菌环节，在接种前应将肉汤培养液（或马铃薯培养液）经高压蒸汽灭菌并冷却后备用 不能在冰箱中培养，应置于适宜温度下（比如28℃）培养 先将盖玻片放到计数室上，将培养液滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入 只计数相邻两边及其顶角的酵母菌数 2．5M6×105 不需要 本实验旨在探究培养液中酵母菌在一定条件下的种群数量变化，只需分组重复实验，获得平均值即可

【解析】

探究培养液中酵母菌种群数量与时间变化关系的实验原理：

（1）酵母菌可以用液体培养基来培养，培养液中的酵母菌种群的增长情况与培养液中的成分、空间、pH、温度等因素有关，我们可以根据培养液中的酵母菌数量和时间为坐标轴做曲线，从而掌握酵母菌种群数量的变化情况.

（2）利用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的细胞计数法，这种方法可以直接测定样品中全部的细胞数目，所以一般用于单细胞微生物数量的测定，由于血球计数板上的计数室盖上盖玻片后的容积是一定的，所以可根据在显微镜下观察到的细胞数目来计算单位体积的细胞的总数目。

（1）实验步骤中有两处错误：①缺少灭菌环节，在接种前应将装有5mL肉汤培养液（或马铃薯培养液）塞上棉塞，经高压蒸汽灭菌并冷却后备用；②不能在冰箱中培养，应置于适宜温度下（比如28℃）培养。

（2）用血球计数板计数酵母菌个数时，取适量培养液后的操作是先将盖玻片放到计数室上，将培养液滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。

（3）观察值是血球计数板上若干方格内的酵母菌数的平均值，对于压在一个方格界限上的酵母菌应该只计数相邻两边及其顶角的酵母菌数。每个小方格的体积=2×2×0.1=0.4立方毫米，共有酵母菌10×M6个细胞。10mL培养液中酵母菌的个数=10×1000×10×M6÷0.4=

2.5M6×105个。

（4）本实验旨在探究培养液中酵母菌在一定条件下的种群数量变化，只要分组重复实验，获得平均数值即可，不需要设置对照实验。