Question

完成下列题目：

（1）基因工程的核心步骤是_________________________。

（2）PCR扩增过程中，延伸阶段的实质是在_________________酶的作用下，合成子链。

（3）将目的基因导入大肠杆菌细胞中，常用_______处理细胞，使细胞处于感受态。

（4）单克隆抗体可制作诊断盒，用于准确、快速诊断H₇N₉病毒感染者，这种诊断运用了______________杂交技术。

（5）受精卵在体外培养时，培养液中除了加水、无机盐、维生素、葡萄糖、氨基酸等分泌的营养成分外，往往需要特别加入__________，同时在含5%_______的无菌、恒温培养箱中进行培养。

（6）在胚胎移植前，通过__________技术可获得较多胚胎。在胚胎移植过程中，供体、受体动物选择好后，要用激素进行_____________处理，使供、受体的生理状态相同。

（7）动物细胞融合技术常用的诱导因素有PEG、电激、和___________________，培养液中共有_____种类型的融合细胞（只考虑两两融合）。

Answer

基因表达载体的构建 热稳定DNA聚合（或Taq） Ca2+（或CaCl2） 抗原—抗体 血清 CO2 胚胎分割 同期发情 灭活的病毒 3

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取的方法有：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

2、单克隆抗体制备的大致过程是利用特定抗原刺激小鼠产生已免疫的B淋巴细胞，提取这种B淋巴细胞与小鼠体内提取的具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合，经过不断筛选，得到既能迅速增殖又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，再经过细胞培养，制备提纯出所需的单克隆抗体。

3、动物细胞培养的条件：①无菌、无毒的环境：消毒、灭菌；添加一定量的抗生素；定期更换培养液，以清除代谢废物。②营养物质：

糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。③温度和pH。④气体环境：95%空气和5%的CO2，其中CO2的作用是调节细胞培养液的pH。

4、细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。诱导动物细胞融合时，常用的诱导因素有聚乙二醇、电激和灭活的病毒等。

（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建 。

（2）PCR扩增技术合成子链时用的是热稳定DNA聚合酶（或Taq酶）。

（3）将目的基因导入微生物细胞中，常用Ca2+（或CaCl2）处理细胞，使细胞处于感受态。

（4）特异性抗体与与相应抗原具有特异性结合的特性，利用抗原-抗体杂交技术可以将单克隆抗体制成诊断盒，用于准确、快速诊断H7N9病毒感染者。

（5）受精卵在体外培养时，需要向培养液中添加血清等天然物质，同时在含5%CO2的的无菌、恒温培养箱中进行培养。

（6）胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。所以在胚胎移植前，通常通过胚胎分割技术获得较多的胚胎。在胚胎移植过程中，供体、受体动物选择好后，要用激素进行同期发情处理，使供、受体的生理状态相同。

（7）在诱导细胞融合时，常用的诱导因素有PEG、电激和灭活病毒，若考虑两两融合，则有AA、BB和AB三类细胞。