Question

某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂
1．4g	2．1g	0．2g	1．0g	10．0g	1．0g	15．0g

（1）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌?_____（能/不能），原因是________________。

（2）培养基用___________方法灭菌，培养皿用__________方法灭菌，待培养基冷却到___________℃左右时，在_____附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。

（3）统计土壤样品中活菌数目：将土壤样品稀释100倍，然后将0．1mL稀释液分别接种到3个平板上； 经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出土壤样品的活菌数为___________．对获得的目的菌种，可采用____的方法长期保存．

（4）培养分解尿素的细菌时，需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是__________________。

（5）实验中使用过的培养基及其培养物必须经过___________处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。

Answer

不能 培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物（培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素） 高压蒸汽灭菌 干热灭菌 50 酒精灯火焰 3．8×107 甘油管藏 将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生 灭菌

【解析】

筛选纤维素分解菌需要以纤维素为唯一的碳源的选择培养基.分离纤维素分解菌计数时需要用稀释涂布平板法接种。

（1）据表分析，表中的蛋白胨可以为微生物的生存提供氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物，所以不能分离尿素分解菌。

（2）微生物培养中的培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌，玻璃器皿可以使用干热灭菌。倒平板时需要培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰旁进行，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基造成污染。

（3）根据题意可知，每升样液中的活菌数为（39+38+37）÷3÷0.1×100×1000=3.8×107。对获得的目的菌种，可采用甘油管藏的方法长期保存。

（4）检测培养基是否被污染，需要将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生，如果有菌落数目被污染，否则没有被污染。

（5）为防止微生物污染环境和操作者，实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌后倒掉。